摇蚊基因组 DNA的提取方法研究-论文.pdf

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1、第32卷第2期湖北民族学院学报(自然科学版)Vo1．32No．22014年6月JournalofHubeiUniversityforNationalities(NaturalScienceEdition)Jun．2014摇蚊基因组DNA的提取方法研究方响亮，彭琴，伊剑锋，万玮，傅悦(1．湖北民族学院生物科学与技术学院，湖北恩施445000；2．生物资源保护与利用湖北省重点实验室(湖北民族学院)，湖北恩施445000)摘要：采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaC1法4种方法提取摇蚊基因组DNA．通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和

2、280nm的吸光值，根据A260／A280的比值检测其纯度和浓度．采用PCR技术获得摇蚊COI基因，用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI．综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法．结果表明：SDS法所得样品DNA纯度最高，试剂盒法所得DNA浓度最大．同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出：试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法，其次为SDS法或CTAB法(改良)．关键词：摇蚊；基因组DNA；提取方法；SDS；CTAB；NaC1；试剂盒中图分类号：Q958．5文献标志码：A文章编号：1008-8423(2014)02-0183-05Resear

3、chonExtractionMethodofGenomicDNAfromChironomidaeFANGXiangliang，PENGQin，YIJianfeng，WANWei，FUYue，(1．SchoolofBiologicalScienceandTechnology，HubeiUniversityforNationalities，Enshi445000，China；2．TheKeyLaboratoryofBiologicalResourcesProtectionandUtilizationofHubeiProvince(HubeiUniversityforNationali

4、ties)，Enshi445000，China)Abstract：Thisresearchusedfourmethods(animalgenomicDNArapidextractionkitmethod，SDSmethod，CTABmethodandNaC1method)toextractthegenomicDNAofChironomidae，andthenre—spectivelymeasuredtheabsorbancevalueofDNAsamplebyultravioletspectrophotometerinopticalwave—lengthof260nmand280

5、nm，andcheckeditspurityandconcentrationaccordingtotheratioofA260／A280．Finally，thePCRresultsoftheCOIgeneofChironomidaeweretestedwithagarosegelelectropho·resis，throughtheanalysisofcomprehensivespectrophotometryandelectrophoresisresultsselectingthemostsuitablemethodforextractingChironomidaegenomi

6、cDNA．TheresultsshowthatwecangetthesamplesofthehighestpuritybySDSmethod，ofmaximumconcentrationbythekitmethod．ThroughCOB·prehensineanalysisofpurityandconcentrationwereachtheconclusionthatthekitmethod(improved)isthebestmethod，followedbytheSDSandCTAB(improved)．Keywords：Chironomidae；genomicDNA；DNA

7、extractionmethod；SDS；CTAB；NaC1；Kit．作为现代生物系统学和生物进化学研究的热点方向之一，分子生物学的相关技术在鉴别动物物种、遗传多样性分析以及物种起源和进化等方面的研究中常被用到．目前，该技术已普遍应用到昆虫的相关研究上．基因组DNA的提取质量是开展后续分析检测工作的重要基础，为了成功从昆虫中提取到高质量的基因组DNA，前人就其提取方法进行过大量的研究．张大治等运用CTAB法和蛋白酶K法(SDS法)提取蜻蜒基因组DNA，研究结果表明2种方法均较适宜