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《摇蚊基因组 DNA的提取方法研究-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第32卷第2期湖北民族学院学报(自然科学版)Vo1.32No.22014年6月JournalofHubeiUniversityforNationalities(NaturalScienceEdition)Jun.2014摇蚊基因组DNA的提取方法研究方响亮,彭琴,伊剑锋,万玮,傅悦(1.湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施445000;2.生物资源保护与利用湖北省重点实验室(湖北民族学院),湖北恩施445000)摘要:采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaC1法4种方法提取摇蚊基因组DNA.通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和
2、280nm的吸光值,根据A260/A280的比值检测其纯度和浓度.采用PCR技术获得摇蚊COI基因,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI.综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法.结果表明:SDS法所得样品DNA纯度最高,试剂盒法所得DNA浓度最大.同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出:试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法,其次为SDS法或CTAB法(改良).关键词:摇蚊;基因组DNA;提取方法;SDS;CTAB;NaC1;试剂盒中图分类号:Q958.5文献标志码:A文章编号:1008-8423(2014)02-0183-05Resear
3、chonExtractionMethodofGenomicDNAfromChironomidaeFANGXiangliang,PENGQin,YIJianfeng,WANWei,FUYue,(1.SchoolofBiologicalScienceandTechnology,HubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China;2.TheKeyLaboratoryofBiologicalResourcesProtectionandUtilizationofHubeiProvince(HubeiUniversityforNationali
4、ties),Enshi445000,China)Abstract:Thisresearchusedfourmethods(animalgenomicDNArapidextractionkitmethod,SDSmethod,CTABmethodandNaC1method)toextractthegenomicDNAofChironomidae,andthenre—spectivelymeasuredtheabsorbancevalueofDNAsamplebyultravioletspectrophotometerinopticalwave—lengthof260nmand280
5、nm,andcheckeditspurityandconcentrationaccordingtotheratioofA260/A280.Finally,thePCRresultsoftheCOIgeneofChironomidaeweretestedwithagarosegelelectropho·resis,throughtheanalysisofcomprehensivespectrophotometryandelectrophoresisresultsselectingthemostsuitablemethodforextractingChironomidaegenomi
6、cDNA.TheresultsshowthatwecangetthesamplesofthehighestpuritybySDSmethod,ofmaximumconcentrationbythekitmethod.ThroughCOB·prehensineanalysisofpurityandconcentrationwereachtheconclusionthatthekitmethod(improved)isthebestmethod,followedbytheSDSandCTAB(improved).Keywords:Chironomidae;genomicDNA;DNA
7、extractionmethod;SDS;CTAB;NaC1;Kit.作为现代生物系统学和生物进化学研究的热点方向之一,分子生物学的相关技术在鉴别动物物种、遗传多样性分析以及物种起源和进化等方面的研究中常被用到.目前,该技术已普遍应用到昆虫的相关研究上.基因组DNA的提取质量是开展后续分析检测工作的重要基础,为了成功从昆虫中提取到高质量的基因组DNA,前人就其提取方法进行过大量的研究.张大治等运用CTAB法和蛋白酶K法(SDS法)提取蜻蜒基因组DNA,研究结果表明2种方法均较适宜
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