春兰基因组DNA提取方法的比较.pdf

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1、第53卷第12期湖北农业科学Vo1．53No．122014年6月HubeiAgriculturalSciencesJun．，2014春兰基因组DNA提取方法的比较李小玲．华智锐(商洛学院生物医药工程系，陕西商洛726000)摘要：为研究了春兰(Cymbidiumgoeringii)因组DNA的最佳提取方法．以商洛野生春兰为试验材料，分别采用SDS法、CTAB法、高盐CTAB法提取了春兰基因组DNA。结果表明，高盐CTAB法提取效果较好，其次是CTAB法，SDS法提取效果最差。关键词：春兰(Cymbidiumgoeringii)；DNA提取；浓度；纯度中图分类号：Q943．2文献标识

2、码：A文章编号：0439—8114(2014}12-2923-02ComparativeStudiesonExtractingGenomeDNAofCymbidiumgoeringiiLIXiao-ling，HUAZhi-rui(DepartmentofBiomedicalMedicineEngineering，ShangluoUniversity，Shangluo726000，Shaanxi，China)Abstract：ToexploretheoptimalgenomicDNAextractionmethodofCymbidiumgoeringii，withwildCymbid

3、iumgoeringiiinShangluoasexperimentalmaterial，genomicDNAofwildCymbidiumgoeringiihasbeenextractedbythemethodofSDS，CTABandhighsaltCTAB．TheresultsshowedthathighsaltCTABwasthebestofthreemethods，followedbyCTABandSDS．Keywords：Cymbidiumgoeringii；DNAextraction；concentration；purity春兰(Cymbidiumgoeringii)

4、又名草兰、山兰，是市板桥镇下弯村海拔约750m处的林下阴坡，将采国兰中栽培与观赏历史最为悠久的种类之一。目前，回的兰花种于花盆中并放置阴凉处备用。DNA提取对春兰的研究主要集中在组织培养[1I、栽培、非共前1d，剪取健康完整的春兰幼嫩叶片，将叶片上残生萌发和共生菌[s，等方面，而对春兰分子遗传学留的杂质用去离子水冲洗干净，用滤纸将水吸干，方面的研究报道较少[1I。获得高质量的基因组DNA待室温晾干后用灭过菌的剪刀将兰花剪成碎片，用是分子遗传学研究的基础。兰科植物组织细胞中含纸包好，保存于一2Occ冰箱中备用。有大量酚类、多糖等次生代谢产物。给基因组DNA1．I．2主要试剂三羟甲基氨

5、基甲烷(Tris)、乙二胺四的提取造成了困难。酚类物质容易氧化，氧化后与乙酸二钠(EDTA-2Na)、硼酸(Boricacid)、聚乙烯基吡DNA形成共价结合而导致DNA褐变．引起DNA的咯烷酮(PVP)、十二烷基硫酸钠(SDS)、溴化十二烷基丢失；多糖类物质容易与DNA产生沉淀，导致DNA三甲基铵(CTAB)、琼脂糖、超纯水、溴化乙锭(EB)、氯样品的流失]。本研究采用SDS法、CTAB法、高盐仿、异戊醇、浓盐酸、固体氢氧化钠、氯化钠、无水乙醇、CTAB法口．7提取商洛野生春兰基因组DNA．探索最适B一巯基乙醇均购自西安沃尔森生物技术有限公司。合春兰基因组DNA的提取方法。旨在为

6、今后春兰1．1-3主要仪器高压蒸汽灭菌锅、HNZ一2—2F型种质资源学及其种群遗传结构研究提供依据。垂直流行超净工作台(上海苏进仪器设备厂监制，南通沪南科学仪器有限公司制造)；FA2004N型电1材料与方法子天平、U755B型紫外可见光分光光度计(上海精1．1材料密科学仪器有限公司制造)；H2050R型台式高速冷1．1．1春兰的采集与预处理试验材料采于商洛冻离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；GelDoc收稿日期：2013～12—13基金项目：陕西省科技厅科研基金项目(2009K01—11)作者简介：李小玲(1980一)，女，陕西蓝田人，讲师，硕士，主要从事观赏植物生物技术研究，

7、(电话)15991997558(电子信箱)lxlflower@163．con。湖北农业科学2014正2000凝胶成像系统(美国Bio·Rad公司)等。较差。3种方法所提取的基因组DNA的电泳条带均1．2方法有轻微的拖尾现象，原因可能是春兰材料在储存和1．2．1基因组DNA的提取①称取0．2g春兰叶操作过程中产生了DNA的部分降解，从图1可以明片，用去离子水冲洗干净，并用滤纸吸干水分。②将显看出，基因组DNA有部分降解为约2000bp大小叶片剪成1em左右碎片，放入预冷