5种提取三七基因组dna方法的比较

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1、—54—江苏农业科学2014年第42卷第5期白雪嵩，赵昶灵，陈中坚，等．5种提取三七基因组DNA方法的比较［J］．江苏农业科学，2014，42(5):54－56．5种提取三七基因组DNA方法的比较11211白雪嵩，赵昶灵，陈中坚，翁晨，王文亚(1．云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明650201;2．云南省文山市苗乡三七实业有限公司，云南文山663000)摘要:用高盐低pH值法、尿素法、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法、SDS(十二烷基磺酸钠)法、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)法提取一年生三七叶的基因组DNA，用紫外分光光度法测定提取的DNA浓度，用琼脂糖凝胶电泳法测定提

2、取的DNA质量。结果表明:用CTAB法提取的基因组DNA含量、得率最高，分别为41．4343～43．2336μg/mL、114．8295～127．2824μg/g，且D260nm/D280nm均在标准值范围内，D260nm/D230nm小于1．9，有ＲNA污染;SDS法、PVP法、尿素法也可以提取基因组DNA，但含量较低;高盐低pH值法提取的DNA浓度最低，电泳图基本看不到明显条带。将这5种方法进行对比，最终确定CTAB法为三七基因组DNA的最佳提取方法。关键词:三七;基因组DNA;提取方法;比较+中图分类号:S567．236．01文献标志码:A文章编号:1002－130

3、2(2014)05－0054－03三七(Panaxnotoginseng)别称田七、金不换，为五加科人作为孑遗植物，三七中含有大量的酚类和黄酮类物质，因参属植物，《本草纲目拾遗》中记载:“人参补气第一，三七补此提取三七的基因组DNA具有一定难度，然而在三七的生理血第一，味同而功亦等，故称人参三七，为中药之最珍贵者”，生化、分子生物学研究中均需要提取基因组DNA，因此开展［1］可见三七是一种重要而名贵的药材，扬名中外的中成药三七基因组DNA的提取研究具有重要意义。目前，尚无三七“云南白药”和“片仔癀”即以三七为主要原料制成。三七味基因组DNA提取方法的研究报道，本试验研究了

4、5种提取三甘、微苦，性温，归肝、肾经，具有止血、散瘀、消肿、止痛等功七基因组DNA的方法，以期为三七的科学贮藏及其基因组效。三七的分布范围狭窄，仅分布于23°30'N附近的中、高海DNA的快速、有效提取提供技术支持。［2］拔地区，中国的三七主产于云南西南的山区，云南省文山1材料与方法州现在被定为三七的原产地和主产地。三七的栽培条件甚为苛刻，性喜温凉，一般多栽培于年相对湿度较大的半山区缓坡1．1试验材料地上，忌阳光直射，需透光率为15%的人工阴棚才可正常生试验所用的三七叶均采自云南省砚山县苗乡三七实业有［3］长，宜在海拔为1500m左右的地区种植。限公司科技园的苗圃(104

5、．3225°E，23．5302°N)。于2013年植物基因组DNA的提取方法具有特殊性，提取难易程度7月13日16:35从株高(10．475±2．008)cm、株间距(5．670±2各不相同，主要影响因素有以下几点:(1)取材种类。不同植1．382)cm、种植密度(423．200±15．296)m的三七试验地中物DNA的最佳提取方法不同，如棉花的最佳提取方法是按“1株1叶”的原则均匀采集一年生的三七叶，小心装入纱［4］CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法，茴香的最佳提取方法布采样袋中直至装满。系好标签牌并标注采集的编号、样品［5］是SDS(十二烷基磺酸钠)法。(2)取材部位

6、。已有研究表名称和时间，然后小心放入液氮中保存。明，果树基因组DNA提取所需的材料可以是嫩叶、成熟叶、幼将液氮中保存的三七叶样品于实验室中进行后续处理。［6］嫩果实、韧皮部及形成层组织等;郭金英等对桃基因组以“后放入先取出”的顺序取出纱布采样袋，先将采样袋拉至DNA的提取方法及部位进行比较研究发现，从嫩叶和幼嫩果液氮罐口，等采样袋不再往下滴落大量液氮时迅速转移至试［7］实中提取的DNA产率较高，因此用一般植物的嫩叶可以提验台上，在台上垫上1层厚纸板，用硬物将袋中的三七幼叶迅取出较高含量的基因组DNA。(3)取材时间。吴少华等在对速趁脆打碎至粉状，然后将采样袋中的碎样转移入

7、50mL离木奈基因组DNA的提取研究中发现，老叶提取的DNA含量心管中，标记好样品名称和时间，置于－80℃超低温冰箱保［8］和质量都不如幼叶;沈向等认为，3月采集的植物幼叶中提存备用。重复上述步骤，处理全部样品。试验时所需的叶片［9］取的DNA质量比9月的高;彭建营等提出，取样时间对所再用液氮进行更细致的研磨。［10］提基因组DNA的质量无影响，但与产量有关，以旺盛生长1．2试验试剂［6］期的幼叶或嫩梢尖最佳。高盐低pH值法提取缓冲液:100mmol/LNaAc，50mmol/LEDTA(乙二胺四乙酸)，500mmol/LNa