大豆蚜基因组DNA四种提取方法的比较-论文.pdf

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1、第32卷第4期大豆科学Vo1．32No．42013年8月SOYBEANSCIENCEAug．2013大豆蚜基因组DNA四种提取方法的比较张拓，庞春杰，韩岚岚，赵奎军(东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨150030)摘要：以大豆蚜(和hisglycines)为材料，比较分析了氯仿一异戊醇抽提法、盐析法、KAc法及试剂盒法4种基因组DNA提取方法。结果表明：在提取大豆蚜基因组DNA的纯度上，氯仿一异戊醇抽提法和盐析法较高；提取所用时间由短到长依次为试剂盒提取法、盐析法、氯仿一异戊醇抽提法和KAc法。盐

2、析法能够更快速有效地提取大豆蚜基因组DNA，是一种值得推广应用的基因组DNA提取方法，另外3种方法也有一定的优势，应根据试验条件和要求选择相应的基因组DNA提取方法。关键词：大豆蚜；基因组DNA；提取方法中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2013)04-0473-04ComparisonofFourMethodsforGenomicDNAExtractionfromAphisglycinesZHANGTuo，PANGChun·jie，HANLan—lan，ZHA

3、OKui-jun(CollegeofAgrieulture，NortheastAgricuhuralUniversity，Harbin150030，China)Abstract：UsingAphisglycinesasmaterial，fourgenomicDNAextractionmethodincludingchloroform—isoamylalcoholextrac—tion，salting—outmethod，KAcandgenomicDNAkitmethodwerecompareda

4、ndanalyzed．ThepurityofgenomicDNAfromchloroform—isoamylalcoholextractionandsalting-outmethodwasbetterthantheothertwomethods．Andthetotaltimeofex—tractioninascendingordcrwasgenomicDNAkitmethod．salting．outmethod．thechloroform．isoamylalcoholextractionandK

5、Ac．Salting—outmethodactedmorequicklyandeffectively，theotherthreemethodsalsohadsomeadvantages，therefore，thecorrespondingmethodsforgenomicDNAextractionshouldbechosenaccordingtothetestconditions．Keywords：Aphisglycines；GenomicDNA；Extractionmethod大豆蚜(却his

6、glycinesMatsumura)是栽培大豆国内外应用较多的氯仿．异戊醇抽提法、盐析法、(Glycinemax)的主要害虫之一_i。大豆蚜通常密KAc法及试剂盒提取法4种提取小型昆虫DNA方集于大豆植株的顶叶和生长点等部位为害大豆，引法。通过基因组DNA直接琼脂糖凝胶电泳、紫外分起大豆节问缩短、植株矮化等症状，严重地影响大光光度计纯度检测，比较分析了4种方法所提取的豆的产量和品质。。自2000年大豆蚜入侵美国基因组DNA的产量、纯度、结构完整程度以及提取和澳大利亚以来，大豆蚜危害程度连年增加，

7、使其所需时间长短、操作难易程度和所用试剂的毒性大成为一种备受关注的世界性农业害虫J。然而，小，旨在为研究大豆蚜寻找一种高效、便捷的DNA目前对大豆蚜的综合治理仍以化学防治为主。化提取方法，以满足对其进行分子生物学研究的省学农药的使用不仅严重影响了大豆的品质、污染环时、操作简便要求，为进一步开展大豆蚜种群遗传境、危害人畜安全，而且会使大豆蚜产生抗药性J，学和生物防治研究提供基础。因而人们开始探索利用大豆蚜天敌进行生物调控1材料与方法的途径控制其危害¨J。利用分子生物学技术评价大豆蚜的生物防治作用，

8、在大豆蚜的防治上起到了1．1材料很大作用¨⋯。其中大豆蚜基因组DNA的提取方供试虫源为大豆蚜(却hisglycinesMatsumura)，法的优化作为这类研究的基础工作之一，显得尤为采集地为黑龙江省哈尔滨市东北农业大学香坊实重要。研究中不仅要保证大豆蚜基因组DNA的高习基地。供试大豆蚜采集后转移到1．5mL离心管产量、高纯度、结构完整，更重要的是寻求一种步骤中，无水乙醇浸泡，置于一20℃保存。简单、耗时少、成本低、安全可靠的基因组DNA提1．2主要药品及仪器取方法。本试验以大豆蚜为试验材料，比