QIAGEN试剂盒提取DNA步骤.doc

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1、QIAGEN试剂盒提取DNA步骤缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀，使用前检查，必要时65摄氏度预热溶解（注意加完乙醇后就不能再加热）缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇（96%-100%）1.研磨前擦拭工作台。2.研钵里加入液氮，预冷。研磨材料，加3-5次材料，充分研磨。液氮预冷离心管后加入材料，加至1/2或2/3处。若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。拿出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。3.加入440ml缓冲液AP1（必须为预热好的），。盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。4.加4mlRNase后，剧烈涡旋，使管底的材料也

2、与液体混合。5.将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。准备冰盒。6.加入130ml缓冲液AP2，上下颠倒混匀，在冰上放置5Min。7.14000rpm/min离心5min.8.仔细缓慢将上层液体（500ml）置于QIAshredderMiniSpinColum（柱）中（紫色）。14000rpm/min离心2min.9.将上步中的滤液（450ml）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的Axygen离心管）中，注意别吸到管底细胞碎片小球。10.在溶解清液中仔细缓慢加入1.5倍体积（675ml）的缓冲液AP3/E。一定要仔细，慢

3、慢抽吸至两者充分混匀。11.将上步中650ml混合液（包括形成的沉淀）加入DneasyMiniSpinColum（柱）中（白色），其余的混合液留着，用于再次抽提。³8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液。准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。12.剩余的混合液继续加入上一步的DneasyMiniSpinColum（柱）中，³8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min，丢弃废液和收集管。13.将DneasyMiniSpinColum（柱）下置试剂盒提供的2ml离心管（取时手不要伸进去，

4、隔着塑封袋捏出离心管）。加入500ml缓冲液AW，放置3-5min，³8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1Min,丢弃废液，收集管再用一次。14.DneasyMiniSpinColum（柱）中加入500ml缓冲液AW，放置3-5min，14000rpm/min离心3Min,丢弃废液,收集管再用一次。15.DneasyMiniSpinColum（柱）中加入500ml无水乙醇，放置3-5min，14000rpm/min离心3Min,丢弃废液和收集管16.在DneasyMiniSpinColum（柱）下置1.5或2ml离心管（自己准备

5、的Axygen离心管）,吸取100ml灭菌的去离子水（必须为预热的）加到Dneasy膜上。65摄氏度水浴5min。³8000rpm/min（一般用14000rpm/min）离心1min洗提DNA。