植物叶片DNA提取步骤.doc

《植物叶片DNA提取步骤.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、植物叶片DNA提取方案CTAB法基本步骤如下：①取鲜样0．2g左右置研钵中，加2％不溶性PVP、液氮研磨至粉末状，转入2mL离心管；②加入0．7mL65℃预热的CTAB提取液，混匀，65℃水浴30min；③加入等体积酚／氯仿／异戊醇（25∶24∶1），混匀，室温10000r／min离心10min；④取上清液，重复步骤③1～2次；⑤取上清液，加1／2体积的5mol／LNaCl，加2／3体积的异丙醇，置－20℃冰箱2h，沉淀DNA；4℃、10000r／min离心10min；⑥弃上清，用70％乙醇溶液洗沉淀2次，风干，用50μLTE溶解；⑦加入无DNase的RN

2、ase至终浓度为10μg／μL，37℃保温30min，－20℃保存备用。(8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h；(9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；(10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中-20℃放置0．5h，12000rpm，离心10min，去上清液；(11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；）2%CTAB提取液：100mmol／LTris－HCl（pH8.0），1.4mol／LNaCl，20g／LCTAB，20mmol／LEDTA，1％β－巯

3、基乙醇（用前加）。