细胞DNA提取步骤.doc

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1、细胞DNA提取步骤1.HCT116细胞吸去培养基，PBS洗两次。2.胰酶消化2min。3.2ml培养基终止消化。4.全部吸入15ml离心管中，离心300G3min。5.弃去上清，用3ml冷的（4°）PBS重悬，离心。6.200ul冷（4°）PBS重悬，转入1.5mlEP管，加入25ul的OB，涡旋混匀。7.加入220ul的BL，70°孵育10min。（期间短暂的涡旋几次）。8.加入220ul的无水乙醇，涡旋混匀。9.把液体全部转入柱子中（已套收集管），离心10000rpm，1min。10.弃滤液，加入500ul的HBC（已加异丙醇），离心10000rpm，1

2、min。11.弃滤液，加入500ul的DNAWashBuffer（已加无水乙醇），离心10000rpm，1min。两次。12.柱子室温干燥2min。13.弃套管，柱子转到1.5ml微量离心管上，加入70ul的ElutionBuffer（于70°提前预热），70°孵育2min，10000rpm，1min。洗脱两次。14.于–20°保存。