qiagen-组织提取试剂盒

《qiagen-组织提取试剂盒》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、DNA的提取田秀君鉴于从现场收集的麻风标本多为全血，皮肤活检标本，鼻拭子，因此着重介绍从全血，皮肤活检标本中提取DNA的方法。实验一皮肤组织中的DNA的提取实验目的：掌握从皮肤组织中提取麻风基因组DNA的方法原理及应用：麻风基因组DNA通常先用SDS裂解，蛋白酶K消化细胞，利用酚，酚/氯仿抽提纯化，经异丙醇或乙醇沉淀，获得基因组DNA。适用于PCR扩增，Southern分析等实验。商品化的试剂盒不需要酚/氯仿纯化，乙醇沉淀，而是将皮肤组织经裂解液裂解，将裂解后的液体进入含硅藻滤膜的纯化柱，基因组DNA被吸附，洗

2、液穿过纯化柱被抽走。这种方法具有快速，简便，安全的优势。方法一：使用商品化的试剂盒提取基因组DNA实验材料一试剂盒成分:QIAampDNABloodMiniKit试剂盒成分本实验使用量QIAampSpinColumn1个CollectionTubes2个BufferATL180ulBufferAW1500ulBufferAW2500ulBufferAE100ulQIAGENProteinaseK20ul二，其他试剂，仪器及耗材1.5ml的离心管旋涡混合器55℃水浴箱台式离心机（14000rpm)96-100%乙醇0

3、.8%琼脂糖凝胶及电泳装置实验步骤准备样本将皮肤组织标本从70%的酒精中取出，放入1×TE中浸泡1小时，取出后用消毒的剪刀，镊子将其剪成肉泥状。消化样本将肉泥状的皮肤组织放入EP管中，加入消化液ATL180ul和蛋白酶K20ul,55℃消化大约72h，期间用旋涡混合器振荡混合助溶。消化好的样本成清亮透明。加入200ul的溶液AL，旋涡混合均匀70℃孵育10min,加热灭活蛋白酶K加入200ul的（96-100%）的乙醇，旋涡混合数秒轻轻的将离心管内的混合物转移到离心柱内（切勿接触到离心柱沿），盖上管盖，8000rp

4、m离心1分钟将离心柱置于一个干净的2ml收集管内，将含有过滤物的旧管丢弃加入500ul的溶液AW1，8000rpm离心1分钟将离心柱置于一个干净的2ml收集管内，将含有过滤物的旧管丢弃加入500ul的溶液AW2，14000rpm离心3分钟将离心柱置于一个干净的2ml收集管内，将含有过滤物的旧管丢弃洗脱基因组DNA将离心柱置于一个干净的1.5ml的离心管内，将含有过滤物的旧管丢弃加50ul的溶液AE室温孵育5分钟8000rpm离心1分钟离心后的管底溶液即为所提取的DNA检测：琼脂糖凝胶电泳法观察基因组DNA实验二

5、从全血中提取DNA实验目的：掌握从人的全血中提取基因组DNA的方法。原理及应用：大体与从皮肤组织中提取的原理及应用相同。实验材料一试剂盒成分:DNeasyTissueKit试剂盒成分本实验使用量QIAampSpinColumn1个CollectionTubes2个BufferAL200ulBufferAW1500ulBufferAW2500ulBufferAE100ulQIAGENProtease20ul实验步骤（一）准备样本将冻存在-40℃的样本取出，在37℃水浴中迅速解冻，融化。离心法纯化基因组DNA在1.5m

6、l的离心管底加入20ul的蛋白酶在离心管中加入200ul的全血再加入200ul的溶液AL，旋涡混合15秒56℃孵育10分钟瞬时离心将离心管盖上的样品甩下来加入200ul的（96-100%）的乙醇，旋涡混合15秒。瞬时离心。下述步骤同从皮肤组织中提取DNA提取鼻拭子DNA的方法刘健在1.5mlEp管中放入500ulPBST.将鼻拭子棉花端剪下，放入Ep管中，使其棉花端完全浸入PBST中将Ep管放入4°C冰箱静置4-6小时从冰箱中取出Ep管，挤干鼻拭子的水分，并弃去鼻拭子将Ep管放入4°C离心机，离心20min，130

7、00转取出Ep管，小心地吸去上清，保留沉淀加入50ul0.1M的Tris-Hcl/EDTA，反复冻融（-40°C---90°C）3次加入10ul20ug/ml蛋白酶K，在56°C水浴箱中孵育过夜在放入100°C中灭活10min放入-20°C冰箱中保存