心肌线粒体提取试剂盒

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1、3北京宝赛生物技术有限公司产品说明书心肌线粒体提取试剂盒说明：该试剂盒针对心肌组织的结构特点，特别提供适于从心肌组织中提取线粒体的溶液，可以快速简单的从动物的心肌组织中分离线粒体，并且具有较好的完整性。利用该试剂盒提取的粗制线粒体可直接进行线粒体的相关研究，如线粒体的功能分析、线粒体相关的凋亡研究、线粒体相关的蛋白质组研究等，可进一步制备超纯线粒体，还可以将提取的线粒体作为原材料，进行亚线粒体的制备。产品组成（10~20g组织）：·分离介质（5×）60ml·保存介质（5×）10ml保存条件：4℃或-20℃保存，有效期6个月。使用注意事项

2、：1.使用该试剂盒前请认真阅读该使用说明书及使用注意事项；2.实验前应将实验动物（大鼠）饥饿处理大于12小时以上，以去除心肌组织内的糖元和脂肪，降低内源性底物，否则可能会影响某些测定指标；3.提取过程的各种操作尽量在冰上进行，离心机在使用前要提前预冷至0～4℃；4.匀浆使用的匀浆器不能过紧，建议使用较松的匀浆器，上下均匀匀浆，不要左右旋转，并且匀浆动作要轻柔，避免剧烈操作，避免气泡产生，否则易造成提取的线粒体受损，不能用于呼吸功能相关的指标检测；5.操作步骤中的离心力指标为一建议值，请根据不同离心机的不同转头型号进行微调，以获得最佳提取

3、效果和较高的蛋白得率；6.试剂盒中提供的分离介质（5×）与保存介质（5×），出现结晶析出是正常现象；建议于实验前一天，将两种溶液先在温水浴中使之完全溶解，充分混合均匀，立即冷至室温后用去离子水稀释成使用液（1×），放于0～4℃预冷；7.所用试验材料（动物组织）一定要新鲜，取材后应马上进行提取操作，不能冷冻处理；TEL:010-82899839/69FAX:010-82899869Http://www.biosea.netE-mail:market@biosea.netbiosea@163.com（本公司所有产品仅供科研使用）3北京宝赛生

4、物技术有限公司产品说明书1.提取后的粗制线粒体如果用于线粒体功能检测，如测定呼吸控制率或磷氧比值等指标，则应在提取后马上测定，建议冰上放置时间最佳不超过4小时，最长不超过10小时，以保证测定结果的准确性；2.因试剂盒提供的溶液中含有较高浓度的糖分，建议所有溶液在运输与使用过程中不得离开低温环境；若一次使用不完，可将1×的使用液于4℃存放；3.每克心肌组织可得约10mg左右的粗制线粒体总蛋白，若需提高得率，可以将第一次的沉淀重复匀浆一次，最终的得率可提高约70%左右。操作步骤：1.将实验动物（大鼠）饥饿处理大于12小时以上，以去除心肌组织

5、内的糖元和脂肪；2.断头处死实验动物（大鼠），取下心脏，剥离瓣膜，挤去心脏中的血液，放于冷的蒸馏水中洗去血液；3.将心脏组织置于已预冷的表面皿中，并将表面皿置于冰上，用弯头小剪刀将心脏反复剪碎，直至剪成肉泥；4.按照5ml～8ml／g组织的用量加入分离介质（如组织很少，可以适当增加介质的量），将剪好的组织转移到预冷的玻璃匀浆器中，上下均匀匀浆10次，注意尽量避免出现气泡；5.将匀浆液离心，1000g～1500g4℃离心10mins（BeckmanJA-25.50转头建议1200g）；6.取上清，于10000g～13000g左右4℃离心1

6、0mins（BeckmanJA-25.50转头建议12000g）；7.弃去上清，小心的获得沉淀，即为粗制线粒体；8.取少量保存介质（建议每克组织加入保存介质约100ul～200ul），将沉淀悬浮起来，用较小匀浆器匀浆或者用较大的Tip头缓慢的吹打均匀，操作中尽量避免出现气泡，取样测定蛋白浓度。建议粗制线粒体的保存浓度以大于20mg／ml为宜；9.如实验需要提高得率，可将步骤5中得到的沉淀再次用步骤4中分离介质体积的一半重复匀浆过程一次；10.重复步骤5～7。将两次所得的粗制线粒体合并。经过二次匀浆，总蛋白得率可提高约70%左右。需要用户

7、自备：·手术器械（实验动物取材用）·表面皿、玻璃匀浆器若干·精密电子天平·移液器＆移液管TEL:010-82899839/69FAX:010-82899869Http://www.biosea.netE-mail:market@biosea.netbiosea@163.com（本公司所有产品仅供科研使用）3北京宝赛生物技术有限公司产品说明书·冰浴·高速冷冻离心机附：心肌线粒体呼吸控制率（RCR）的测定（RCR的测定也可以按照文献进行，不要求必须使用本方法）实验方法：氧电极法实验仪器：生物测氧仪（国产）测定介质：225mM甘露醇70mM蔗

8、糖1mMEDTA0.1%BSA10mM磷酸钾缓冲液，PH7.4测试方法：1.预热生物测氧仪30分钟，恒温30℃；2.调节氧电极，用保险粉测试电极探头，确保仪器设施良好，可用于样品的测定；3.在反应槽中加入测