m5纤维类组织rna快速提取试剂盒

《m5纤维类组织rna快速提取试剂盒》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、北京聚合美生物科技有限公司Mei5Biotechnology,Co.,LtdM5纤维类组织RNA快速提取试剂盒使用说明书产品名称单位货号M5纤维类组织RNA快速提取试剂盒50TMF168-05【储存条件】1)所有溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。2)不合适的储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃-25℃）进行。3)为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.25

2、ml（20次）和0.5ml（50次）RNase-freeH2O溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后可立即按照每次使用量分装冻存，-20℃保存。4)避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。【产品简介】独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNasefreeH2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

3、【产品特色】1)离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。2)不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。3)快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。4)多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。【产品组份】50T注意事项裂解液RLT50ml室温密闭干燥保存去蛋白液RW140ml室温密闭干燥保存漂洗液RW10ml初次使用前请按瓶标说明加入指定量的无水乙醇RNase-

4、FreeH2O40ml室温密闭干燥保存蛋白酶K粉末20mg-20度RNase-Free吸附套管50套室温密闭干燥保存北京市海淀区学院路甲5号768创意园B-1211热线电话：（86）010-82714490北京聚合美生物科技有限公司Mei5Biotechnology,Co.,Ltd【注意事项】1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。2.需要自备乙醇，β-巯基乙醇，一次性注射器，研钵，水浴锅等。3.裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化

5、合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。4.预防RNase污染，应注意以下几方面：1)经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。2)使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。3)RNA在裂解液RLT中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。4)配制溶液应使用无RNase的水。（将

6、水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）5.关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,本公司的EASYspin系列RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR扩增过程中极其微量的DNA残留（一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大,如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：1)选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这

7、样DNA就不能作为模板参与扩增反应。2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。3)将RNA提取物用RNase-free的DNaseI处理。本试剂盒还可以用于DNaseI处理后的RNA清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。4)在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNaseI处理。请联系我们索取具体操作说明书。6.RNA纯度及浓度检测：完整性：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150v，15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的

8、RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5kb和2kb，分别相当于28S和18SrRNA。动物RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍，否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。纯