easyspin 石蜡包埋组织rna快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

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1、杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外EASYspin石蜡包埋组织RNA快速提取试剂盒目录号：RN3001适用范围：适用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR。v试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN3001)

2、裂解液PKD室温15ml结合液RBC室温25ml漂洗液RW室温10ml第一次使用前按说明加指定量乙醇蛋白酶K粉40mg/ml-20℃20mgRNase-freeH2O室温10ml基因组DNA清除柱和收集管室温50套RNA吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。3.为避免降低活性，方便运输，提供蛋

3、白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.5毫升灭菌水溶解（终浓度40mg/ml）-5-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量)分装冻存，－20℃保存。1.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。v注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。2.样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或者产量降

4、低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。3.裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。4.预防RNase污染，应注意以下几方面：1)经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污

5、染。2)使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。3)RNA提取过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。4)配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）5.关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留-5-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com（DNase消化也无法做到100%无残留

6、），本公司的EASYspin固定包埋组织RNA快速提取试剂盒，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：1)选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。2.RNA纯度及浓度检测：完整性：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；15

7、0v，15分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA与蛋白反应交联会导致RNA断裂或者降解，一般电泳后UV下只能看到模糊弥散（smear）带型，随着储存的时间越长，降解断裂越严重，甚至只能看到峰值仅仅在100bp左右的模糊条带。这都属于RNA提取正常情况。纯度：OD260/OD280比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280读数（10mMTris,pH7.5）在1.8-2.1之间。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mM