EASYspinPlus多糖多酚复杂植物RNA快速提取试剂盒操作方法和步骤说明书

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1、杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.comEASYspinPlusComplexPlantRNAKitEASYspinPlus多糖多酚/复杂植物RNA快速提取试剂盒目录号：RN53v适用范围：适用于快速提取植物组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术可有效清除电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。v试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN5301)裂解液CLB室温50ml裂解液RLTPlus室温25ml去蛋白液RW1室温40ml漂洗液RW室温10ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RN

2、ase-freeH2O室温10ml基因组DNA清除柱和收集管室温50套RNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。储存事项：1.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。注意事项1.所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。n杭州昊鑫生物科技股份有限公司h

3、tpp://www.hzhxbio.com1.需要自备β-巯基乙醇，乙醇，研钵(可选)。2.样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。3.裂解液CLB和RLTPlus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。4.关于DNA的微量残留:一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（

4、DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的EASYspinPlusRNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：1)选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。3)将RNA提取物用RNase-free的DNaseI处理

5、。本试剂盒还可以用于DNaseI处理后的RNA清洁(cleanup)，请联系我们索取具体操作说明书。4)在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNaseI柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒(货号：RN34)前可先索取具体操作说明书。v操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：ð第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!ð取1ml裂解液CLB至离心管内(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入5%β-巯基乙醇（1mlCLB加50μlβ-巯基乙醇）。颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备

6、。1.直接研磨法（实验室无液氮情况下或者柔软易研磨植物样品推荐此法）:a.新鲜植物组织或者冰冻保存样品称重后取100-200mg（水分少的样品如叶片种子等可加100-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些）迅速剪成小块放入研钵，加入1mlCLB（已加有β-巯基乙醇）室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液CLB立刻充分接触以抑制RNA酶活性。n杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.comβ-巯基乙醇是裂解液CLB的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到10-20%。如果特别复杂植物，可以尝试在裂解液中加入PVP4

7、0至终浓度2%。b.将裂解物转入离心管，立即剧烈振荡15秒，短时放回65°C水浴中（5-10min），中间偶尔颠倒1-2次帮助裂解。13，000rpm离心10分钟，沉淀不能裂解的碎片。c.取裂解物上清（在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。d.立刻接操作步骤的步骤3。1.液氮研磨法（适用广泛，提取复杂难破碎，易降解样品时推荐此法）:a.液氮中研磨新鲜或-70

8、°C冷冻的材料至细粉。b.转移100-