rnablood超纯全血总rna快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

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1、杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外RNAblood超纯全血总RNA快速提取试剂盒目录号：RN25目录编号包装单位RN250250次v适用范围：适用于快速提取全血高纯度总RNAv试剂盒组成、储存、稳定性：﹢试剂盒组成保存50次10X红细胞裂解液R

2、LB裂解液RL室温4℃避光25ml50ml去蛋白液RE室温25ml漂洗液RW室温10ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-freeH2O室温10ml70%乙醇室温9mlRNase-freeH2O第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free吸附柱RA室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。-5-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.c

3、om1.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光保存。2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。v产品介绍：1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!2.所有离心步骤如未加说明，均在室温进行。使用转速可以达到13，000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。3.裂解液RL和去蛋白液RE

4、中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。4.考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿，用户使用前需要自备氯仿。5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带，分别为~5Kb（28S），~2Kb（18S），条带亮度比值约为2：1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S，tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4，5条带也属于正常现象，如果RNA未成熟的

5、前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。6.检测OD260/OD280吸光度比值时，RNA样品应该溶于TE后检测，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和PH值低，会使OD280升高，从而使比值降低。7.加入裂解液RL匀浆后，加氯仿前，样品可在–60℃-70℃保存一个月以上。8.关于DNA的微量残留：-5-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,在大多数RT-PCR扩增过程中极其微

6、量的DNA残留（一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大,如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：1)选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。3)将RNA提取物用RNase-free的DNaseI处理。4)在步骤去蛋白液RE漂洗后，直接在吸附柱RA上进行DNaseI消化处理。v操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）ð提示：第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇!ð

7、使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。1.在适合大小的RNasefree离心管中加入1体积（0.5-1.0ml）加入各种抗凝剂新鲜血液(颠倒混匀后)和3体积的红细胞裂解液RLB,颠倒混匀,可轻弹管壁,确保混匀。病人血样中白细胞数量可能大幅增加或者减少,应该适当增加或者减少处理量。2.室温放置10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。如果RNA降解严重,可在冰上裂解,但是时间可长一些以充分裂解。3.12,000rpm离心20秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底

8、白细胞团。离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团