easyspin 植物microrna快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

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1、杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.comEASYspinPlantmicroRNAKitEASYspin植物microRNA快速提取试剂盒目录号：RN40v适用范围：适用于快速提取植物microRNA或者microRNA/总RNA分别提取。v试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN4001)裂解液RLTPlus室温50mlPLANTaid室温5mlWashSolution1室温12ml第一次使用前加入28ml无水乙醇WashSolution2/3室温10ml第一次使用前加入42ml无水乙醇RNase-freeH2O室温10ml基因

2、组DNA清除柱和收集管室温50套RNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存6个月不影响使用效果。储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。3.WashSolution2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，直接不吸晶体，吸上清使用就可以。4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。v注意

3、事项1.所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000rpm杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。1.需要自备乙醇，β-巯基乙醇，研钵(可选)。2.样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。3.裂解液RLTPlus和WashSolution1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套

4、，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。4.关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），该产品由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，个别特殊情况需要清除微量基因组DNA残留，可使用以下几种DNA酶消化的方式。1)传统DNA酶消化提取的RNA/microRNA，热灭活DNA酶后直接用于后续实验。2)传统DNA酶消化提取的RNA/microRNA，然后使用RNA清洁纯化试剂盒（货号：RN14，但是需要将说明书

5、改动一个地方，第二步加入250μl无水乙醇改成加入700μl无水乙醇)清洁纯化后用于后续实验。3)直接在吸附柱RA上进行DNaseI柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒(货号：RN34，但是需将说明书的去蛋白液RW1改成WashSolution1)可先索取具体操作说明书。5.碰到特别复杂多糖多酚，淀粉等次级代谢产物特别丰富的样品，如葡萄果实，水稻种子，裂解液RLTPlus效果不佳的情况下，应该购买专用裂解液CLB。裂解液CLB是本公司为特别复杂的多糖多酚植物样品研发的最强配方，绝大部分裂解液RLTPlus无法提取的复杂样品都可以提取成功。见附录3。v操作步骤：（实验前请

6、先阅读注意事项）提示：ð第一次使用前请先在WashSolution1和WashSolution2/3瓶加入指定量无水乙醇!ð对于RNA酶或者多酚特别丰富植物组织：操作前在裂解液RLTPlus中加入β-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com巯基乙醇至终浓度1%，如1mlRLTPlus中加入10μlβ-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLTPlus4℃可放置一个月。1.直接研磨法（提取简单植物样品推荐此法，但是简单样品也可以用液氮研磨法）:a.新鲜植物组织称重后取100mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100

7、mg放入研钵），加入10体积（1ml）RLTPlus和1体积（100μl）PLANTaid室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLTPlus立刻充分接触以抑制RNA酶活性。注：PLANTaid是提取多糖多酚次级代谢产物色素含量丰富的困难样品不可缺少成分。b.将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13，000rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid。c.取480μl裂解物上清（在不超过基因组DNA清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量，如残留基因组D