新型植物基因组dna快速提取试剂盒操作方法与步骤说明书

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1、◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN150150次DN1502100次DN1503200次v适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNAv试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNaseA(10mg/ml)-20℃2

2、50μl500μl1ml缓冲液AP1室温25ml50ml100ml缓冲液AP2室温10ml20ml40ml缓冲液AP3/E室温15ml25ml50ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB室温15ml25ml50ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB室温15ml20ml40ml吸附柱AC室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加

3、热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。v产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后

4、经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。v产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。2.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。3.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/

5、OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。v注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。3.缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。4.不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。5.洗脱液EB不含有螯合剂ED

6、TA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。v操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：ð第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!ð第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇!1.取适量植物组织（新鲜组织100mg或干重

7、组织20mg，可适当多取一些样品弥补粘在研钵上的损失）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。研磨前，可准备一个1.5ml离心管，加入400μl缓冲液AP1和4μlRNaseA(10mg/ml)室温备用。1.转移细粉（新鲜组织100mg或干重组织20mg）到前面准备的1.5ml离心管（已加入400μl缓冲液AP1和4μlRNaseA(10mg/ml)旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。2.65℃水浴10分钟，在水浴过程中颠倒

8、离心管2-3次，混合样品。3.加入130μl缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置5分钟，14,000rpm离心5-10分钟，小心吸取上清到一个新的1.5m