细菌DNA提取试剂盒-柱式.doc

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1、技术咨询电话：400-607-9999细菌DNA提取试剂盒-柱式ColumnBacterialDNAout货号:M090075产品及特点本产品是在本公司在本公司细菌DNAOUT基础上开发的柱式升级产品，可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。1.操作简单，整个过程不到20分钟。2.产率一般在5-20ug/mL过液培养的饱和菌液（108-109个细胞）。3.OD260/280一般在1.8以上，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。4.DNA片段长度一般在40-50Kb左右。5.每次提取可以处理0.1-1.5mL的细菌，也可以使用菌落。6.价廉物美，与国外同类产

2、品相比质量相当，但价格便宜。7.安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。规格及成分成份50次包装溶菌酶600mg溶液A15mL溶液B7.5mL溶液C30mL溶液D5mL离心吸附柱50套通用洗柱液50mL通用洗脱液5mL使用手册1份注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途技术咨询电话：400-607-9999运输及保存常温运输，4℃保存，有效期一年。使用方法注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。一:对革氏阴性细菌样品1.将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心管中

3、，12,000rpm室温离心1分钟沉淀细菌，弃上清。2.加入300uL预热的溶液A到细菌沉淀中，充分吹打均匀。3.再加入150uL预热的溶液B到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠，可以采取称量方法取用，150uL约等于150-160mg。也可以将1mL枪头剪去一截再吸取。4.65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。5.加入200uL自备氯仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。6.12,000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中，避

4、免触及中间层的白膜。7.加入1.5倍体积(约0.7mL)的溶液C+溶液D的新鲜混合液（0.6mL溶液C加0.1mL溶液D），颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。8.12,000rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。9.将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中，12,000rpm室温离心1分钟，弃穿透液。10.重复上步操作一次。11.空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。12.加50-100uL通用洗脱液，室温放置3-5分钟。13.12,000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。14.由于本产品使用

5、的离心吸附柱吸附DNA的能力较强，可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途技术咨询电话：400-607-99991.直接取5-10uL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。二:对革氏阳性细菌样品1.将0.1-1.5mL过夜培养的革氏阳性细菌12,000rpm室温离心1分钟后,重悬于0.6mL溶菌液中（溶菌液配制:30mL无菌水+600mg溶菌酶，配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀5-10次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。2.12,000

6、rpm室温离心10分钟，小心弃上清。3.后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。三:其他注意事项1.可以直接使用细菌菌落提取DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中，后续操作同上。2.从单个菌落中提取到的DNA较少，所以只用30uL通用洗脱液洗脱。使用效果图注:用本产品提取1.0mL过夜培养的E.coliTg1细菌，DNA最后溶于100uLTE中，取20uL上样。M表示全长的lDNA,其余均为提取的样品DNA。背景资料G+和G-细菌细胞壁比较细胞壁特性革氏阴性菌革氏阳性菌厚度10nm20-80nm细胞膜层数21肽聚糖（Peptidoglycan）含量10-20%>

7、50%磷壁酸（Teichoicacid）无有脂及脂蛋白含量58%0-3%蛋白含量9%0%脂多糖（Lipopolysaccharide）含量13%0对青霉素敏感性低高对溶菌酶（Lysozyme）敏感性低高注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途