Ndfip1对奥沙利铂诱导的神经母细胞瘤细胞凋亡的保护作用.pdf

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1、分类号Ｒ５９２义号ＭＺ１八２２ＵＤＣ密级壤叫义葦ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕去学住冷文（专业型）Ｎｄｆｉｌ对奥沙利钻诱导的神经母细胞瘤ｐ细胞调ｔ的保护作用蒋新锋，，江２２５００９巧甘教帅姓名：程宏教授扬州大学苏扬州，中巧学化级别；：硕壬学科Ｖ＃名巧；老年医学论文捉交口巧ｊ：２０１５．０５．２０论文答辩口巧ｊ．０５．２９；２０１５．２０１５学化授卞中．０６．３０化：扬州大学学化授予日朔：答辩委员么上化：方琪教授２０１５年０

2、６月蒋新锋对奥沙利钻诱导的神经母细胞瘤细胞调亡的保护作用ＩＮｄｆｉ１对奥沙利钻诱导的神经母细胞瘤细胞调ｔ的ｐ保护作用摘要研究表明，在帕金森病患者脑组织中发现有大量的神经元发生程序性死亡，即细胞调ｌ４亡，有关实验证明，神经细胞损伤后高表达的Ｎｄｆｉｐ蛋白，可与Ｎｅｄｄ家族蛋白结合，通过泛素化清除错误折叠的蛋白，进而抑制神经细胞的洞亡。本实验采用了人神经母细胞瘤ＳＨ－Ｓ巧Ｙ细胞及过表达Ｎ地－ＭＣ－ｐｉ蛋白的ＳＮ１细胞作为研究对象，通过奧沙利钻诱导ＮｄｆｉＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞调亡，

3、研究在ｐｌ蛋白过表达情况下对细胞增殖和调亡的影响，探讨Ｎｄｆｉｐｌ对神经细胞的保护作用。一－第部分稳定转染Ｎｄｆｉｌ的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞的鉴定。ｐ首先通过对实验室冻存细胞的复苏－ＳＹ－－，传代ｙＸ获得稳定生长的ＳＨ５Ｙ和ＳＮＭＣ１细Ｂ－ＭＣ－１胞，同时通过Ｗｅｓｔｅｒｎｌｏｔ法对ＳＮ细胞蛋白表达进行鉴定，确认获得稳定可控的Ｎｄｆｉｐｌ蛋白表达，供本次实验所用，并通过细胞冻存，使得细胞株得Ｗ延续。－第二部分Ｎｄｆｉｐｌ对奥沙利巧诱导的細ＳＹ５Ｙ细胞调亡的保护作用。－首先，选取典型抗肿瘤药物奥

4、沙利巧，作用于ＳＨＳＹ５Ｙ细胞，通过ＭＴＴ比色法，鉴别经不同药物浓度及不同作用时间作用后对细胞生存率的影响情况，并对数据进行分析，４－－－得出半数有效抑制浓度；然后通过加入ＨＴ诱导ＳＮＭＣ１细胞大量表达Ｎｄｆｉｐｌ蛋白，－ｉ经ＭＴＴ比色法可观察到Ｎｄｆｐｌ蛋白高表达后的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞较野生型细胞増殖抑制率有所下降－，推断Ｎｄｆｉｐｌ蛋白能够对抗奥沙利祐对ＳＨＳＹ５Ｙ细胞的增殖抑制作用。最后利用流式细胞仪技术检测单独应用奧沙利钻诱导的细胞调亡水平，Ｗ及过表达的Ｎｄｆｉｐｌ蛋白对奧沙利钻诱导细胞

5、调亡的影响，同时对两组数据进行分析，结果提示Ｎｄｆｉｐｌ蛋白对奧沙－－利钻诱导的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞调亡具有保护作用，同时检测到调亡蛋白Ｃａｓｐａｓｅ３表达的减少，一Ｎｄ进步表明ｆｉｐｌ蛋白可能通过抗稠亡作用实现其神经保护作用。综上，本实验佐证了Ｎｄｆｉｐｌ蛋白对神经细胞的俱护作用，表明其可能对帕金森病的治一疗具有潜在的正性作用，进步研究其抗调亡机制及相关作用祀点和信号通路，会对疾病的治疗产生积极的影响。－：Ｎ地ｉ；；ＳＨＳＹ５Ｙ关键词ｐ；神经保护；细胞獨亡奧沙利轴；帕金森病扬州大学硕±学位

6、论文２ＡｂｓｔｒａｃｔＲｅｓｅａｒｃｈｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｒｅａｒｅａｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｎｅｕｒｏｎｓａｐｏｐｌ：ｏｓｉｓｉｎｔｈｅｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｐａｔｉｅ打ｔｓｗｋｈＰａｒｋｉｎｓｏ打Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｒｅｌｅｖａｎｔｅｘｅｒｉｍｅ打ｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｎｅｒｖｅｃｅｌｌｓｗｏｕｌｄｈｉｈｌｐｇｙｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅＮｄｆｉｐｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎａｔｉｅｎｔｓ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｃｏｍｂｉｎｅｗｉｔ

7、ｈＮｅｄｄ４ｒｏｔｅｉｎｆａｍｉｌｙ，ｃｌｅａｒｔｈｅｐｐｍｉｓｆｏｌｄｅｄｒｏｔｅｉ打ｓｂｙｕｂｉｕｉｔｉｎａｔｉｏ打出ｅｎｓｕｒｅｓｓａｏｔｏｓｉｓｏｆｎｅｒｖｅｃｅｌｌｓ．Ｔｈｉｓｅｘｅｒｉｍｅｎｔｐｑ，ｐｐｐｐｐ－－ｅｓｔａｂｓｃｅｍａｎｕｒｏｂａｓｔｏｍａ－ｌｉｈａｋｉｎｄｏｆｌｌｍｏｄｅｌｏｆＨｕＮｅｌ：ＳＨＳＹ５ＹｃｅｌｌｓａｎｄＳＮＭＣ１ｃｅｌｌｓｗｈ－ｅｘｒｅｓｓｎｄｕｃｎｎｔｏｔｈｅｃｅｓｗｅｗｏｕｍｄｅｃａｓｅｉｃｈｏｖ

8、ｅｒｉｎＮｄｆｉｌ．ＢｉｉＯｘａｌｉｌａｔｉ打ｉｌｌｌｄｆｔｈｓｐｇｐｙｇｐ，－ｅｘｒｅｓｓ－ｔｔｗｉｔｈｏｖｅｒｐｉ打ｇＮｄｆｉｐｌｄｏｉｎｆｌｕｅｎｃｅＳＨＳＹ５Ｙｃｅｌｌｓｏ打ｐｒｏｌｉｆｅｒａｉｏｎａｎｄａｐｏｐｏｓｉｓ，ａｎｄｔｈｅｎｗｅｃｏｕｌｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｏ化ｃｔｉｖｅ