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时间:2020-03-06
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1、分类号R592义号MZ1八22UDC密级壤叫义葦YANGZHOUUNIVERSITY硕去学住冷文(专业型)Ndfil对奥沙利钻诱导的神经母细胞瘤p细胞调t的保护作用蒋新锋,,江225009巧甘教帅姓名:程宏教授扬州大学苏扬州,中巧学化级别;:硕壬学科V#名巧;老年医学论文捉交口巧j:2015.05.20论文答辩口巧j.05.29;2015.2015学化授卞中.06.30化:扬州大学学化授予日朔:答辩委员么上化:方琪教授2015年0
2、6月蒋新锋对奥沙利钻诱导的神经母细胞瘤细胞调亡的保护作用INdfi1对奥沙利钻诱导的神经母细胞瘤细胞调t的p保护作用摘要研究表明,在帕金森病患者脑组织中发现有大量的神经元发生程序性死亡,即细胞调l4亡,有关实验证明,神经细胞损伤后高表达的Ndfip蛋白,可与Nedd家族蛋白结合,通过泛素化清除错误折叠的蛋白,进而抑制神经细胞的洞亡。本实验采用了人神经母细胞瘤SH-S巧Y细胞及过表达N地-MC-pi蛋白的SN1细胞作为研究对象,通过奧沙利钻诱导NdfiSH-SY5Y细胞调亡,
3、研究在pl蛋白过表达情况下对细胞增殖和调亡的影响,探讨Ndfipl对神经细胞的保护作用。一-第部分稳定转染Ndfil的SHSY5Y细胞的鉴定。p首先通过对实验室冻存细胞的复苏-SY--,传代yX获得稳定生长的SH5Y和SNMC1细B-MC-1胞,同时通过Westernlot法对SN细胞蛋白表达进行鉴定,确认获得稳定可控的Ndfipl蛋白表达,供本次实验所用,并通过细胞冻存,使得细胞株得W延续。-第二部分Ndfipl对奥沙利巧诱导的細SY5Y细胞调亡的保护作用。-首先,选取典型抗肿瘤药物奥
4、沙利巧,作用于SHSY5Y细胞,通过MTT比色法,鉴别经不同药物浓度及不同作用时间作用后对细胞生存率的影响情况,并对数据进行分析,4---得出半数有效抑制浓度;然后通过加入HT诱导SNMC1细胞大量表达Ndfipl蛋白,-i经MTT比色法可观察到Ndfpl蛋白高表达后的SHSY5Y细胞较野生型细胞増殖抑制率有所下降-,推断Ndfipl蛋白能够对抗奥沙利祐对SHSY5Y细胞的增殖抑制作用。最后利用流式细胞仪技术检测单独应用奧沙利钻诱导的细胞调亡水平,W及过表达的Ndfipl蛋白对奧沙利钻诱导细胞
5、调亡的影响,同时对两组数据进行分析,结果提示Ndfipl蛋白对奧沙--利钻诱导的SHSY5Y细胞调亡具有保护作用,同时检测到调亡蛋白Caspase3表达的减少,一Nd进步表明fipl蛋白可能通过抗稠亡作用实现其神经保护作用。综上,本实验佐证了Ndfipl蛋白对神经细胞的俱护作用,表明其可能对帕金森病的治一疗具有潜在的正性作用,进步研究其抗调亡机制及相关作用祀点和信号通路,会对疾病的治疗产生积极的影响。-:N地i;;SHSY5Y关键词p;神经保护;细胞獨亡奧沙利轴;帕金森病扬州大学硕±学位
6、论文2AbstractResearchsshowthattherearealargenumberofneuronsapopl:osisinthebraintissuesofpatie打tswkhParkinso打Diseases.Relevantexerime打tsshowthatnervecellswouldhihlpgyexpresstheNdfiplproteininatients,whichcouldcombinewit
7、hNedd4roteinfamily,cleartheppmisfoldedrotei打sbyubiuitinatio打出ensuressaotosisofnervecells.Thisexerimentpq,ppppp--estabscemanurobastoma-lihakindofllmodelofHuNel:SHSY5YcellsandSNMC1cellswh-exressnducnntotheceswewoumdecaseichov
8、erinNdfil.BiiOxalilati打illldfthspgpygp,-exress-ttwithoverpi打gNdfipldoinfluenceSHSY5Ycellso打proliferaionandapoposis,andthenwecouldexplorethero化ctive
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