全反式维甲酸与奥沙利铂在诱导人胃癌　bgc823细胞凋亡中的协同作用

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1、全反式维甲酸与奥沙利铂在诱导人胃癌　BGC823细胞凋亡中的协同作用：邵应举，郑玉玲，樊青霞，赵培荣【摘要】目的观察全反式维甲酸(ATRA)与奥沙利铂(LOHP)对人胃癌BGC823细胞增殖的影响。方法分别用ATRA和LOHP单独及联合作用于人胃癌BGC823细胞，采用MTT法检测细胞增殖抑制率，倒置显微镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;免疫细胞化学技术检测BGC823细胞中Bcl2和Survivin蛋白的表达情况。结果ATRA作用后BGC823细胞的增殖受到抑制，细胞

2、形态发生了改变，凋亡比例明显增加;与LOHP联用后，该作用加强。胃癌BGC823细胞中Bcl2和Survivin蛋白的表达在ATRA作用后均受到抑制，ATRA与LOHP联合作用后蛋白表达的阳性率进一步降低。结论ATRA能抑制人胃癌BGC823细胞的生长，与LOHP联用具有协同抑制作用，其机制可能与下调Bcl2和Survivin蛋白表达有关。【关键词】全反式维甲酸;奥沙利铂;胃癌BGC823细胞;凋亡;Bcl2;Survivin　　ABSTRACT:ObjectiveToobservethee

3、ffectsofalltransretinoicacid(ATRA)andoxaliplatin(LOHP)ontheproliferationofhumangastriccancerBGC823cells.MethodsHumangastriccancercellsBGC823orphologicalchangesicroscopeetry.TheexpressionsofBcl2andSurvivinproteinmunocytochemistry.ResultsTheproliferation

4、ofthecellstreatedorphologyofthecellschanged.TheapoptosisrateofBGC823cellsincreasedgraduallyandtheeffectentangastriccancerBGC823cells,andtheinhibitoryeffectissynergisticechanismmightberelatedtothedoangastriccancerBGC823cell;apoptosis;Bcl2;Survivin　　全反式维甲

5、酸(alltransretinoicacid,ATRA)是维生素A的主要代谢产物，能够诱导肿瘤细胞的分化，抑制肿瘤细胞生长。ATRA最初用于急性早幼粒细胞白血病的治疗，近年来已有报道其对消化道肿瘤也有明显治疗作用。奥沙利铂(LOHP)是第3代铂类抗癌化合物，现阶段已被广泛地应用于消化道肿瘤的化疗[1]。ATRA与LOHP联合作用于胃癌是否能够提高疗效，目前未见报道。本研究旨在探讨ATRA与LOHP联用是否可以增强对人胃癌BGC823细胞的抑制作用。　　1材料与方法　　1.1材料ATRA(美国Sigm

6、a公司)避光下用无水乙醇配制成10-2mol/L，过滤除菌后-20℃冰箱避光贮存备用;LOHP(江西恒瑞制药公司)用三蒸水配制成1mg/mL，过滤除菌后4℃冰箱贮存备用;MTT(美国Sigma公司)用PBS液配制成5mg/mL，过滤除菌后4℃冰箱贮存备用;DMSO系美国Sigma公司产品;流式细胞仪系美国BD公司产品;人胃癌BGC823细胞由郑州大学第一附属医院肿瘤实验室提供，常规培养于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液中，在100%湿度、50mL/LCO2、37℃恒温培养箱中培养。　　1.

7、2方法　　1.2.1细胞培养用含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基，置100%湿度、50mL/LCO2、37℃恒温培养箱中培养。隔天换液1次，每4d传代1次，传代时用2.5g/L胰酶溶液消化。　　1.2.2MTT实验取对数生长期细胞，调整密度至3×104/mL，接种于96孔板，分为4组：对照组(1mL/L的无水乙醇)、ATRA组(10-5mol/L)、LOHP组(80mg/L)和联合组(ATRA终浓度为10-5mol/L、LOHP终浓度为80mg/L)。每个浓度设5个复孔。加药后24、48、7

8、2h于倒置显微镜下观察细胞形态变化。加MTT溶液，4h后加DMSO150μL，检测490nm处各孔的A值。细胞生长抑制率(%)=(1-药物组A值均值/对照组A值均值)×100%。　　1.2.3流式细胞术取对数生长期细胞，按5×105/mL的密度接种于6孔板内，待细胞贴壁后加药;作用48h后消化收集细胞，700mL/L冰乙醇固定，流式细胞仪进行细胞周期及细胞凋亡测定。　　1.2.4免疫细胞化学取对数生