小檗碱抑制人胃癌BGC823细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

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1、兰州医学院硕士学位论文小檗碱抑制人胃癌BGC-823细胞增殖及诱导凋亡的实验研究姓名：李国英申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：杨林西2003.5.1兰型堕兰堕丝：!：兰垡堡苎。．—————————————————————————————————————————————一——。小檗碱抑制人胃癌BGC一823细胞增殖及诱导凋亡的实验研究摘要目的：研究小檗碱抑制人胃癌BGC-823细胞增殖和诱导凋亡作用，以及其作用浓度、时间与抑制率、凋亡程度的关系。方法：应用MTT法、集落形成实验、流式细胞仪及免疫组织化学法观察小檗碱抑制

2、BGC．823细胞增殖的作用。应用HE染色、荧光染色，透射电镜、TUNEL、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳及免疫组织化学法观察小檗碱诱导BGC．823细胞凋亡的作用。结果：(1)10—60mg／L小檗碱对BGC．823细胞增殖有抑制作用，抑制作用随时间的延长和浓度的增加而增强，呈时间一剂量依赖性，与对照组相比，有统计学意义(p<0．01)。(2)20～60mg／L小檗碱可诱导BGC．823细胞凋亡，诱导作用随时间的延长和浓度的增加而增强，呈时间一剂量依赖性，与对照组相比，有统计学意义(p<0．01)。光镜、荧光显微镜、透射电镜及TUNEL观

3、察细胞表现出较为典型的细胞凋亡的形态：细胞核固缩，染色质凝集．兰型坠兰堕型!!：堂竺丝苎——断裂，颗粒含量增加；流式细胞仪出现典型的亚二倍体峰；琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特有的梯形条带。(3)免疫组织化学法检测显示小檗碱抑制突变型p53、p21和bcl．2蛋白的表达，促进caspase-3蛋白的表达。结论：小檗碱体外能抑制人胃癌BGC一823细胞增殖并诱导其凋亡，作用呈时间一剂量依赖性。抑制增殖作用机理可能为抑制突变型p53、p21蛋白表达，阻滞细胞进入细胞周期。诱导凋亡作用机理可能为抑制bcl．2蛋白表达和促进caspase．3蛋白表达，

4、从而诱导BGC．823细胞凋亡。关键词：小檗碱，人胃癌细胞BGC．823，细胞增殖，细胞周期，细胞凋亡兰丛堕兰堕堡：!堂竺堡苎．——STUDYONBERBERINEINHIBITINGPROLIFERATIONANDINDUCINGAPOPTOSISOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLBGC-823ABSTRACTPurpose：Tostudytheeffectofberberineininhibitionofproliferationandinductionofapoptosisofhumangastriccarci

5、nomacellBGC-823．Methods：TheeffectofberberineininhibitionofproliferationwasmeasuredbyMTTassay,cloneformationandflowcytometry．TheapoptosisofBGC-823cellinducedbyberberineWasdetectedbyHEstaining，fluorescencestaining，electronmicroscope，TUNEL，agarosegelelectrophoresisandflowcy

6、tometry，respectively．Thelevelsofp53，p21，bcl-2andcaspase·3proteinweredeterminedbyimmunohistochemistry．Results：(1)lO娟0mg／LberberineCallinhibittheproliferationofhumangastriccarcinomaBGC·823cellinatime—anddose-dependentman／ler(p<0．01，comparedwithcontrolgroup)．(2)20～60mg／Lber

7、bednecaninducetheapoptosisofhumangastriccarcinomaBGC一823cellinatime—anddose·dependentmanner(p<0．01，comparedwithcontrolgroup)．Afterexposuretoberberine，theBGC一823兰塑堕兰堕熊!堂簋笙兰一—————————————m———————————————————_———__—-————w——————————一一cellDresentedsomemorphologicfeaturesofapo

8、ptosisincludingcellshrinkage，nuclearcondensation，DNAfragmentationandapoptoticbodiesformation．Sometypica