小檗胺诱导人白血病jurkat细胞凋亡的实验研究

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1、小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究【摘要】［目的］研究小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的机制。［方法］MTT法测人白血病Jurkat细胞IC50值及细胞毒作用，Hoechst33258荧光染色法观察小檗胺凋亡小体形成，流式细胞仪Annexin-ⅤFITC-PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测凋亡峰及细胞周期，同时流式细胞仪检测细胞caspase-3蛋白表达。［结果］小檗胺能选择性抑制人白血病Jurkat细胞生长且呈浓度依赖关系，作用48hJurkat细胞IC50值为6.6±0.5μg/ml；小檗胺能诱导Jurkat细胞凋亡，使细胞周期阻滞于S期；

2、同时细胞caspase-3蛋白表达增高。［结论］小檗胺能激活caspase-3蛋白表达，诱导人白血病Jurkat细胞凋亡且呈时效关系。【关键词】Jurkat细胞ExperimentalStudyofBerbamineInducingApoptosisinHumanLeukemiaJurkatCellsAbstract:［Purpose］ToexplorethemechanismofberbamineinducingapoptosisinhumanleukemiaJurkatcells.［Methods］IC50valueandcytotoxityofhumanJurka

3、tcellsethod;apoptoticbody,byfluorescentstainingethod;apoptoticpeak,cellcycleandprotEinexpressionofcaspase-3,byFCM.［Results］BerbaminecouldsignificantlyinhibittheproliferationofJurkatcellsinadose-dependentmannerandtheIC50valuelat48hours.BerbaminealsoselectivelyinducedapoptosisofJurkatcells

4、ine.［Conclusions］BerbaminecanselectivelyinduceapoptosisofhumanleukemiaJurkatcellsinthemannerofdoseandtimedependencethroughup-regulationexpressionlevelofcaspase-3protein.Keyine;Jurkatcells;apoptosis;caspase-3小檗胺是一种双苄基异喹啉生物碱类化合物，具有抗氧化、免疫抑制、升高白细胞等多种临床作用[1]。最近的研究表明，小檗胺能调节细胞内游离钙浓度[2,3]，下调多药耐药

5、基因表达以逆转多药耐药[4]，有少量研究显示其对肿瘤细胞的增殖抑制作用[5,6]，但其作用机制仍不甚清楚。本实验观察小檗胺对人白血病Jurkat细胞凋亡诱导作用，并对其作用机制进行探讨。1材料与方法1．1药品与试剂MTT、碘化丙啶（PI）、小檗胺、Hoechst33258为Sigma公司产品，RPMI1640培养基为美国Hyclone公司产品，Annexin-ⅤFITC-PI试剂为Immunotech公司产品，Cytofix/Cytoperm、Caspase3-PE及鼠IgG1-FITC/PE同型阴性对照为美国Pharmingen公司产品。1．2实验材料和主要仪器细胞培

6、养瓶及培养板为丹麦Nunclon公司产品；超净工作台及CO2培养箱为德国Heraeus产品；TT法测Jurkat细胞的IC50值及生长抑制曲线取对数生长期细胞接种于96孔培养板内，6复孔。每孔３×104个/ml细胞，加入不同浓度的小檗胺，总体积200μl，培养48h后，每孔加入1mg/mlMTT工作液50μl，37℃放置4h，离心2000r/min，5min，弃上清，每孔加入150μlDMSO，震荡溶解结晶，在波长570nm比色，求出半数抑制浓度IC50及生长抑制曲线。正常对照采用健康人外周血Ficol分离液分离的单个核血细胞。1．5细胞凋亡检测Jurkat细胞经药物不

7、同处理后，取1×10５/ml细胞悬液1ml用磷酸盐缓冲液洗2次后，加入缓冲液490μl、Annexin-Ⅴ5μl和碘化丙锭（PI）5μl，暗处冰上反应10min，上机检测，CellQuest软件分析。另取2×106细胞，70%冰乙醇固定，24h后PBS洗2次，加入1mg/mlRNaseA200μl，37℃水浴30min，再加PI染色液避光反应30min，上机检测10000个细胞，Multicycle软件分析亚二倍体峰及细胞周期。1．6Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态用1mg/mlHoechst332581μl孵育100μl细胞