几种抗肿瘤药物诱导jurkat细胞凋亡的研究论文

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1、几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡的研究论文.freelorDrugsonApoptosisInductioninJurkatCellLineAbstractCisplatin(CDDP)，homoharringtonine(HHT).freelitoxantrone(MIT)andhydroxycamptothecin(HCPT)arehighlyeffectiveanti-tumordrugs.Toevaluatetheireffectsinthetherapyofleukemiaandestablishavaluablemethodtoestimateanti-tu

2、mordrugs，AnnexinV/PIdoubleparameterfloetryloe.DeatheffectsonJurkatcelllinecannotbeobservedineveryexperimentalgroup.Itisconcludedthatloeterfloetrycanbeusedasareliablemethodforclinicalscreeninganti-tumordrugs.Keyordrug;apoptosis;Jurkatcellline;AnnexinV化疗是肿瘤治疗的一种重要方法，新的抗肿瘤药物也不断地涌现。国内在上个世纪90年代上

3、市的抗癌药物中化学合成药米托蒽醌(MIT)、羟基脲和顺铂(CDDP)等少数几种抗癌药物，通过与DNA分子结合抑制核酸合成引起细胞死亡，这类药物称之为细胞周期非特异性药物。本研究选用米托蒽醌(MIT)、顺铂(CDDP)、羟基喜树碱(HCPT)、高三尖杉酯碱(HHT)诱导Jurkat细胞凋亡，并通过AnnexinV/PI法检测细胞凋亡及细胞死亡比例，分析不同作用时间以及不同药物浓度对Jurkat细胞凋亡的影响。材料和方法材料Jurkat细胞系由本实验室保存。顺铂（CDDP）为齐鲁制药有限公司产品、羟基喜树碱（HCPT）为黄石飞云制药厂产品、高三尖杉酯碱（HHT）为杭州民生药业公司

4、产品、米托蒽醌（MIT）为浙江瑞新药业公司产品；RPMI1640为Invitrgen产品；AnnexinVFITC/PI试剂盒购自晶美生物公司；贝克曼流式细胞分析仪EliteEXP。诱导Jurkat细胞凋亡Jurkat细胞在5%CO2孵箱培养至对数生长期，镜下计数为1×106/ml，加入24孔板，每孔1ml细胞悬液。用无血清细胞悬液将顺铂、羟基喜树碱、高三尖杉酯碱和米托蒽醌药物配制成1mg/ml溶液；每组药物分别设4个浓度：12.5、25、50、100μg/ml；分别加入24孔培养板，作3个复孔。置于5％CO2孵箱培养。AnnexinV/PI流式双参数分析［1-3］分别于加入

5、药物作用2、4和8小时，吸取培养细胞悬液，用4℃预冷的PBS洗细胞2次，用250μl结合缓冲液重悬细胞，使其浓度为1×106/ml；取100μl细胞悬液，加5μlAnnexinV/FITC和10μl(20μg/ml)的碘化丙锭；混匀后室温避光孵育15分钟；用PBS洗涤2次，进行流式细胞仪（FACS）分析。AnnexinV-FITC/PI双参数进行调试，以此条件进行细胞凋亡和细胞坏死率检测。图1-5横坐标表示荧光强度，纵坐标表示细胞数，图中两个峰中的左边峰表示阴性峰，右峰表示凋亡峰，右峰曲线下面积越大凋亡就越多。根据所测数据计算细胞凋亡率和继发性坏死率。统计学分析各组细胞凋亡率

6、均取3个样本的均值，以X±SD表示，多个均数的两两比较采用《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包(第三版)PEMS3.1软件进行检验。结果CDDP对Jurkat细胞的诱导凋亡作用CDDP各剂量组与对照组（未处理组）相比，在其剂量为12.5μg/ml时，各个作用时间点上Jurkat细胞凋亡率均无明显变化；剂量为25μg/ml和50μg/ml时，在2小时和4小时Jurkat细胞凋亡率也无明显变化，而在作用8小时时Jurkat细胞凋亡率才有明显增高，分别为13.6%和23.9%，与对照组相比有显著差异（P0.05）。当CDDP药物浓度增大至100μg/ml时，作用2小时和4小时

7、时，Jurkat细胞凋亡率无变化，在8小时时Jurkat细胞凋亡率为19.9%，与50μg/ml剂量相比，诱导细胞凋亡率不但没有明显差别，而且有所降低（图1），这表明CDDP的作用有药物饱和效应。HHT对Jurkat细胞的诱导凋亡作用HHT各剂量组的细胞凋亡率与对照组（未处理组）相比均有明显增高（P0.05）。Jurkat细胞凋亡率与药物剂量关系不明显，但与作用时间明显成正比。12.5μg/mlHHT作用2、4和8小时时Jurkat细胞凋亡率分别是4.9%、20.4%和35.4%(P0.05)；25μg