几种抗肿瘤药物诱导jurkat细胞凋亡的研究

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1、几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡的研究【摘要】　　本研究评价几种临床常用的抗肿瘤药物顺铂（CDDP）、羟基喜树碱(HCPT)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MIT)在白血病治疗中的作用，并分析其在诱导Jurkat细胞凋亡的作用，为白血病的临床治疗提供新的理论依据和思路。用AnnexinV/PI双参数流式分析方法，检测这几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡和死亡的效应。结果表明：MIT和HCPT在加药处理早期4小时(P<0.05)和后期第8小时(P<0.05)都有明显的诱导

2、Jurkat细胞凋亡的效应。HHT有明显诱导Jurkat细胞凋亡的效果，但各剂量组之间无显著差异。CDDP在高浓度和长时间作用时才显示较弱的细胞凋亡效应，明显弱于前3者。各种药物作用后均未观察到明显的细胞死亡效应。结论：MIT诱导Jurkat细胞凋亡的作用最显著，AnnexinV流式分析方法可作为一种可靠的临床药物筛选的方法。【关键词】抗癌药物；细胞凋亡；Jurkat细胞系；AnnexinV　　EffectofSeveralAnti-tumorDrugsonApoptosisInductioni

3、nJurkatCellLine　　AbstractCisplatin(CDDP)，homoharringtonine(HHT)，mitoxantrone(MIT)andhydroxycamptothecin(HCPT)arehighlyeffectiveanti-tumordrugs.ToevaluatethEireffectsinthetherapyofleukemiaandestablishavaluablemethodtoestimateanti-tumordrugs，AnnexinV/P

4、Idoubleparameterfloetryloe.DeatheffectsonJurkatcelllinecannotbeobservedineveryexperimentalgroup.Itisconcludedthatloeterfloetrycanbeusedasareliablemethodforclinicalscreeninganti-tumordrugs.　　Keyordrug;apoptosis;Jurkatcellline;AnnexinV化疗是肿瘤治疗的一种重要方法，新的

5、抗肿瘤药物也不断地涌现。国内在上个世纪90年代上市的抗癌药物中化学合成药米托蒽醌(MIT)、羟基脲和顺铂(CDDP)等少数几种抗癌药物，通过与DNA分子结合抑制核酸合成引起细胞死亡，这类药物称之为细胞周期非特异性药物。本研究选用米托蒽醌(MIT)、顺铂(CDDP)、羟基喜树碱(HCPT)、高三尖杉酯碱(HHT)诱导Jurkat细胞凋亡，并通过AnnexinV/PI法检测细胞凋亡及细胞死亡比例，分析不同作用时间以及不同药物浓度对Jurkat细胞凋亡的影响。材料和方法　　材料　　Jurkat细胞系由

6、本实验室保存。顺铂（CDDP）为齐鲁制药有限公司产品、羟基喜树碱（HCPT）为黄石飞云制药厂产品、高三尖杉酯碱（HHT）为杭州民生药业公司产品、米托蒽醌（MIT）为浙江瑞新药业公司产品；RPMI1640为Invitrgen产品；AnnexinVFITC/PI试剂盒购自晶美生物公司；贝克曼流式细胞分析仪EliteEXP。　　诱导Jurkat细胞凋亡　　Jurkat细胞在5%CO2孵箱培养至对数生长期，镜下计数为1×106/ml，加入24孔板，每孔1ml细胞悬液。用无血清细胞悬液将顺铂、羟基喜树碱、

7、高三尖杉酯碱和米托蒽醌药物配制成1mg/ml溶液；每组药物分别设4个浓度：12.5、25、50、100μg/ml；分别加入24孔培养板，作3个复孔。置于5％CO2孵箱培养。　　AnnexinV/PI流式双参数分析［1-3］　　分别于加入药物作用2、4和8小时，吸取培养细胞悬液，用4℃预冷的PBS洗细胞2次，用250μl结合缓冲液重悬细胞，使其浓度为1×106/ml；取100μl细胞悬液，加5μlAnnexinV/FITC和10μl(20μg/ml)的碘化丙锭；混匀后室温避光孵育15分钟；用PBS

8、洗涤2次，进行流式细胞仪（FACS）分析。AnnexinV-FITC/PI双参数进行调试，以此条件进行细胞凋亡和细胞坏死率检测。图1-5横坐标表示荧光强度，纵坐标表示细胞数，图中两个峰中的左边峰表示阴性峰，右峰表示凋亡峰，右峰曲线下面积越大凋亡就越多。根据所测数据计算细胞凋亡率和继发性坏死率。　　统计学分析　　各组细胞凋亡率均取3个样本的均值，以X±SD表示，多个均数的两两比较采用《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包(第三版)PEMS3.1软件进行检验。　　结果　　CDDP对Jurkat细