死亡受体5诱导jurkat细胞凋亡的作用

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1、死亡受体5诱导Jurkat细胞凋亡的作用【关键词】细胞凋亡RoleofDR5inTRAILinducedapoptosisofJurkatcells　　【Abstract】AIM:TostudytheroleofDR5inTRAILapoptoticsignaltransductioninJurkatcells.METHODS:cDNAcontainingfulllengthextracellulardomainofhumanDR5ologousrebinationsecretedhighlevelsofsDR5.BALB/cmicemunizedAb.ThebindingofantiDR5m

2、AbeasuredforsurfaceexpressionofTRAILreceptorbyfloetricanalysis.Jurkatcellsinedbyfloetry.TheratesofTRAILinducedapoptosisandantiDR5mAbblockingonJurkatcellsetryAb.TheaveragepercentageofblockingAbcanspecificallybindtoDR5andDR5isexpressedathighlevelsonJurkatcells.DR5playsaverykeyroleinTRAILinducedapoptos

3、isinJurkatcells.DR5expressionisimportantfortheinductionofapoptosisbyTRAIL.　　【Keyonoclonal　　【摘要】目的：探讨DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用.方法：用含人全长DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB/c小鼠，制备抗DR5mAb.将96孔U型细胞培养板加1×105/孔Jurkat细胞和5mg/L抗DR5mAb，采用TRAIL试剂盒检测细胞凋亡率.结果：抗DR5mAb与Jurkat细胞表面的DR5作用后，TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎被抗DR5mAb完全阻断，阻断率高达90

4、.49%.结论：DR5在TRAL诱导的Jurkat细胞凋亡中起关键作用.　　【关键词】Jurkat细胞；TRAIL；细胞凋亡；DR5；抗体，单克隆　　0引言　　肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand,TRAIL）是近几年新发现的TNF超家族成员，TRAIL与其受体结合可以诱导大多数肿瘤细胞凋亡而对大多数正常细胞无影响.已经发现，TRAIL有5种受体，即2种死亡受体（DR4,DR5）、2种诱骗受体（DcR1,DcR2）及可溶性受体OPG(osteoprotegerin).其中只有DR4［1］和或DR5有胞内

5、死亡结构域，诱导细胞凋亡.DR4和DR5在诱导细胞凋亡方面具有相同的作用，但哪一种受体在TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡方面更为重要仍不清楚.发展和应用TRAIL不同受体的特异性抗体是分析这两种不同受体所参与的死亡途径的关键.我们用特异性抗DR5mAb阻断DR5的功能，并应用流式细胞仪检测TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡情况，以探讨DR5在TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料　　含有人DR5细胞外结构域全长cDNA的毕赤酵母表达载体菌株由美国宾夕法尼亚大学医学院病理医学实验室陈有海教授馈赠.Jurkat细胞为本室保存细胞株传代培养于含2.0mmol/LL谷氨酰胺、1.

6、5g/L碳酸氢钠、10.0mmol/LHEPES,1.0mmol/L丙酮酸钠、100.0mL/LFBS,1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素的RPMI1640培养基.DMEM/HAT和DMEM/HT选择培养基（Sigma公司）.TRAIL凋亡检测试剂盒（Upstatebiotech）.FACSCalibur型流式细胞仪（美国BD公司）.　　1.2方法　　1.2.1抗DR5mAb制备及特异性鉴定　　1.2.1.1抗DR5mAb制备参照>　　1.2.1.3sDR5对mAb膜结合的阻断作用将10μLsDR5(178mg/L)与100μL杂交瘤培养上清室温反应30min，然后与1×105Jur

7、kat细胞混合，冰浴反应30min.预冷PBS洗涤细胞3次，然后每孔加1μLFITC标记的山羊抗小鼠IgG，冰浴30min.预冷PBS洗涤细胞3次，流式细胞仪进行分析.　　1.2.2细胞表面DR5表达水平检测将生长状态良好的Jurkat细胞用含50g/LBSAPBS洗涤3次，计数细胞，取密度为1×108/L的细胞100μL，加抗DR5mAb1μg，冰浴反应30min.预冷PBS洗涤细胞3次，加PB