槲皮素抑制胃癌bgc823细胞增殖的研究论文

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1、槲皮素抑制胃癌BGC823细胞增殖的研究论文徐永中，范钰，姚广涛，李仪奎【摘要】目的探讨槲皮素治疗胃癌细胞的作用机制。方法采用不同浓度的槲皮素处理胃癌BGC823细胞后，采用四唑盐比色试验检测癌细胞生长，分别以琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞凋亡，分别采用荧光实时定量PCR和ethodsGastriccancerBGC823cellsinedbyMTTassay,andtheapoptosisinedbyagarosegelelectrophoresisandTUNELassays,respectively.Therealtime-PCRandedtostudytheexp

2、ressionofsurvivin.ResultsQuercetinhadaremarkableinhibitionongastriccancercelllineBGC823.FromDNAladderandTUNELassay,apoptosisanner.Inaddition,quercetinresultedindoRNAandproteinfromrealtime-PCRandangastriccancerBGC823cellthroughinducingapoptosisanddoa公司，用DMSO(二甲基亚砜)配成储液，-20℃冰箱保存。实验时用1640培养基稀释，

3、DMSO的最终浓度小于0.9%。人胃癌细胞株BGC823购自中科院上海细胞所细胞库。TriIzol试剂购自Invitrogen公司。BCA蛋白分析试剂盒购自PIERCE公司。细胞凋亡原位检测试剂盒，购自Roche公司。1.2细胞培养及处理胃癌BGC823细胞在37℃，5%CO2培养箱中培养，培养液为含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640（美国GIBCOBRL）。待细胞至指数生长期，收集细胞，调整细胞浓度为1×104/ml，按每孔0.1ml接种到96孔培养板中，24h后，分别加入不同浓度的槲皮素，设3个复孔，培养48h，每孔加入MTT1

4、00μl，作用4h后，加入DMSO100μl，孵育30min，在酶标仪570nm处测吸光度A值，计算抑制率。1.3细胞凋亡检测1.3.1DNA末端原位标记染色法（TUNEL）接种胃癌细胞于24孔板，以不同浓度的槲皮素处理，48h后终止细胞培养，4%多聚甲醛固定30min。其余步骤按Roche公司药盒说明书进行。光镜下计算凋亡指数。凋亡指数（ApoptosisIndex，AI）计算方法：数5个高倍镜＞1000个细胞，分别计数总细胞数量和凋亡细胞数量。AI（%）＝凋亡细胞数/总细胞数×100％。1.3.2琼脂糖凝胶电泳按照文献［3］的方法进行琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下检测并拍照。1.

5、4Survivin基因表达检测1.4.1mRNA水平应用荧光实时定量PCR方法检测。以Trizol抽提细胞总RNA，取总RNA1μg，以OligodT（15mer）为引物逆转录合成cDNA第1链，以此cDNA链2μl为模板进行PCR扩增，步骤参照说明书。引物序列为：上游：5'-ATTTGAATCGCGGGACCC-3'；下游：5'-GAGAAAGGGCTGCCAGGC-3'。FAM探针：5'-CATGGGTGCCCCGACGTTGC-3'-TAMRA。以GAPDH为内参。定量PCR步骤和PCR反应条件参照文献［4］进行。1.4.2蛋白水平采用TT法检测槲皮素对胃癌细胞增殖的抑制

6、作用，发现槲皮素可明显抑制胃癌SGC823细胞的恶性增殖，且在5～40μmol/L浓度范围内，呈明显的浓度依赖性。其IC50约为45.91μmol/L。见图1。2.2槲皮素诱导胃癌细胞BGC823凋亡以不同浓度的槲皮素处理胃癌细胞后，收集细胞，分别采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测（见图2～3）。结果发现，处理组细胞凋亡指数明显增高，DNA凝胶电泳显现明显的梯状图谱，且均呈浓度依赖性（P＜0.05）。2.3槲皮素对胃癌BGC823细胞survivin基因表达的影响以槲皮素处理细胞后，于不同时间收集细胞，分别采用实时定量PCR和RNA和蛋白水平明显降低（P＜0.05）。结果见图4

7、～5。3讨论自1971年美国NCI组织首次发现槲皮素对Ｐ388白血病的抑制作用后，许多研究发现，槲皮素可抑制白血病、结肠癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、膀胱癌等多种癌细胞的增殖，诱导肿瘤细胞发生凋亡［1］。但目前尚无槲皮素处理胃癌细胞的报道。本研究采用槲皮素处理胃癌BGC823细胞，观察了其对增殖的影响，并从端粒酶和细胞凋亡方面初步探索了其可能的机制。凋亡在调控细胞增殖、肿瘤的形成和发展中起关键作用［5］。本研究采用不同浓度的槲皮素处理胃癌细胞，于不同时间收集细胞，分别采用TUNEL和琼脂糖凝胶电泳