shrna干扰胃泌素基因表达对人胃癌细胞bgc823增殖和迁移能力的抑制作用的论文

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1、shRNA干扰胃泌素基因表达对人胃癌细胞BGC823增殖和迁移能力的抑制作用的论文【摘要】目的构建针对人胃泌素基因的shrna干扰表达载体，观察胃泌素基因表达抑制对人胃癌细胞系bgc823细胞增殖和迁移能力的影响。方法根据人胃泌素序列设计并构建3个靶向人胃泌素基因的shrna真核表达载体，以脂质体转染的方法将胃泌素干扰质粒转染至人胃癌细胞系bgc823,经g418筛选出稳定转染的阳性细胞。通过rt-pcr技术筛选出表达抑制最强的稳定转染胃癌细胞系。应用流式细胞仪技术检测其细胞周期变化情况。采用tr

2、ans-igration　　ofhumangastriccancercellbgc823　　liuyan1,gengpaili1,lüyouyong2　　(1.qinghaiuniversitymedicalcollege;　　2.pekinguniversityschoolofoncology，laboratoryofmolecularbiology)　　abstractobjectivetoconstructshrnaexpressionvectortargethumangastringene

3、andtoinvestigatetheeffectofshorthairpinrna(shrna)targetingonthecellcycleofgastriccancerbgc-823cells.methodsshrnaexpressingvectorstargetingtohumangastrinrnalevelofgastrinexpressionigrationcapabilityofstablytransfectedcellsinvitrobermodel.fcmedtodetectt

4、hecellcycle.resultstherebinantplasmidvectorrnaexpressioninbgc-823cells.bgc823cellsembranecellnumberdecreasedsignificantly.conclusionknockdoigrationcapability.　　keyigrationproliferation　　胃泌素(gastrin)是胃窦部和十二指肠的g细胞分泌的一种多肽类激素，在食物消化过程中发挥重要作用。.它是刺激胃酸分泌的最重要的

5、激素，而且对胃肠道粘膜细胞有重要的营养作用。而在近20年的研究中，胃泌素作为单纯消化道激素的概念发生了巨大变化。研究发现胃泌素与其相应受体结合后以自分泌方式对消化道肿瘤细胞的增殖、凋亡及浸润转移等生物学过程进行重要调控。而今，研究者更倾向于认为对正常消化道上皮细胞和肿瘤细胞的自分泌调控作用是消化道胃泌素的最重要功能,胃泌素已成为一类重要的肿瘤自分泌生长因子[1-3]。明晰胃泌素调控作用机制在阐明消化道肿瘤的发病机制，探索有效的内分泌治疗途径方面具有十分重要的意义。　　rna干扰(rnainterf

6、erence,rnai)是近年来发现的一种序列特异的转录后基因沉默现象，是机体用来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制[4，5]。细胞内双链rna在酶的作用下，形成20～25个碱基大小的小干扰rna(smallinterferingrna)，小干扰rna结合多组分核酸酶并使其激活，从而精确降解与序列相同的mrna，抑制该基因在细胞内的翻译表达。小干扰rna是研究未知基因功能的有力工具。近年来应用sirna特异性地抑制病毒体内和体外复制的研究取得了令人瞩目的成果，为sirna作为基因治疗药物的发展

7、起到了推进作用[6]。　　本实验拟构建针对人gastrinmrna的shrna(shorthairpinrnas,shrna)真核表达载体，以脂质体转染人胃癌细胞系bgc823并筛选出稳定转染的细胞，观察其对胃癌细胞迁移和增殖能力的影响，从而为胃癌治疗的分子靶点筛选提供实验室基础依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　胃癌细胞bgc-823(北京肿瘤防治研究所分子生物学实验室);载体psilencertm3.1(ambion公司);t4dna连接酶、bamhⅰ酶、hindⅲ酶(promega公司)

8、;g418(浓度为400μg/ml，gibco-brl公司产品);cdna第一链合成试剂盒、rt-pcr试剂盒(北京全式金公司);trizolreagent(gibco-invitrogen公司);lipofectamim2000(invitrogen公司);transem养基和10%胎牛血清(gibco公司)。　　1.2方法　　1.2.1shrna设计和合成：根据gastrin基因序列(nm_000805)、shrna设计规则及blast同源搜索选取、设计三对引物,每一对引物上游