全反式维甲酸诱导人胆管癌细胞凋亡的作用论文

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1、全反式维甲酸诱导人胆管癌细胞凋亡的作用论文.freelolL-1ATRA的作用效果最好.QBC939细胞经10μmolL-1ATRA处理7d的增殖抑制率可达到60%.光镜及透射电镜下可见细胞恶性表型向正常发生逆转，并可观察到凋亡小体.流式细胞仪分析显示，ATRA处理组细胞周期延迟10%，G1期比例明显升高50.5%，S/G2期比例分别下降39.8%和11.4%.结论A-TRA可抑制胆管癌细胞的增殖，并诱导癌细胞凋亡.Keya;celldifferentia-tion;apoptosisAbstract:AIMTostudytheeffectsofall-tran

2、sretinoicacidonhumancholangiocarcinomacells.METHODSBenzoblue.freelissionelectronicmicroscop-ictechniqueandfloetricanalysisancholan-giocarcinomacelllineQBC939.RESULTSDifferentconcen-trationofall-transretinoicacidcouldinhibittheproliferationofhumanQBC939cell，eef-fect，buttreatmentolL-1.

3、AftertreatedolL-1for7d，theproliferationin-hibitoryrateofQBC939cellsissionelectronicmicro-scope.FloetricanalysisdemonstratedthatthecellcycleofQBC939cellsolL-1all-transretinoicacid.TheG0/G1proportionofthecellcycleacells.0引言全反式维甲酸（all-transretinoicacid，ATRA）对某些肿瘤细胞具有增殖抑制作用［1］，可使肿瘤细胞终末分化

4、，并能诱导肿瘤细胞凋亡［2，3］.我们以胆管癌细胞QBC939细胞为研究对象，探讨ATRA对胆管癌细胞生长的影响及其抗癌机制.1材料和方法1.1材料ATRA购自Sigma公司，台盼蓝、四唑盐（MTT）胰酶购自宝泰克公司，PRMI1640购自Ha-clone公司，小牛血清购自杭州四季清公司.人胆管癌细胞株QBC939细胞，由第三军医大学肝胆外科建立，本室保存.1.2方法人胆管癌细胞株QBC939在含150mLL-1灭活小牛血清的RPMI1640培养基中，于50mLL-1CO2，37℃条件下传代培养.取细胞制成单细胞悬液，计数后备用.将细胞以3×103孔-1接种于9

5、6孔板，培养24h后加入含100，10，1，0.1μmolL-1A-TRA的培养液，设空白对照组.每日台盼蓝染色，细胞计数板内计数，绘制细胞生长曲线.1.2.1MTT法QBC939细胞接种于96孔板，每孔细胞均做10个复孔.10μmolL-1ATRA处理后，根据所需要于2，4，7d中止实验，终止培养前4h加入MTT20μL，待细胞染色后以二甲基亚砜（DMSO）150μL溶解，于酶联免疫检测仪测定A490nm波长的吸光度（A值），计算细胞增殖抑制率.1.2.2细胞形态实验组及对照组QBC939细胞培养3d后，胰酶消化，PBS洗涤、离心，30gL-1戊二醛固定，光镜

6、及透射电镜下观察.1.2.3流式细胞仪分析QBC939细胞用10-5molL-1ATRA处理后，经胰酶消化，700mLL-1乙醇固定，-4℃保存备测.测定时加50mgL-1PI染色，流式细胞仪分析细胞周期.2结果不同浓度的ATRA均对QBC939细胞增殖有抑制作用，且随浓度增大，抑制作用越明显（Fig1）.与对照组比较，1，2组P0.05;3，4组P0.01.但浓度为100μmolL-1导致坏死细胞明显增加，以10-5molL-1抑制作用最理想.图1略2.1MTT法10-5molL-1ATRA处理QBC939细胞，于不同时间终止实验，MTT比色法检测其增生抑制率

7、，2，4，7d分别为10%，35%，60%，呈现明显的时间依赖性（Tab1）.表1MTT比色法检测QBC939细胞增生结果略2.2细胞形态学QBC939细胞经10μmolL-1A-TRA作用24h后，光镜下见细胞生长缓慢，细胞间隙变宽，消化时间缩短，形状由长梭形变为圆形或椭圆形;透射电镜下见细胞核内染色质固缩，成块状或半月状;细胞质浓缩，分泌空泡增加，核蛋白减少，细胞器结构基本完好，溶酶体、内质网较对照组减少;部分细胞裂成碎片，形成细胞质膜包被的许多大小不等的凋亡小体（Fig2）.图2略2.3流式细胞仪分析10μmolL-1ATRA作用不同时间，处理组细胞周期延

8、迟，G0/G1期比例明显