全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化

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1、全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化【关键词】肝细胞癌关键词:维甲酸;苯乙酸钠;肝细胞癌;细胞分化;甲胎蛋白摘要:目的探讨全反式维甲酸（ATRA）和苯乙酸钠（Na-PA）两者对人肝癌细胞联合作用.方法应用台盼蓝染色、MTT法、流式细胞仪、甲胎蛋白测定等方法检测ATRA和NaPA两者联合对人肝癌细胞的诱导分化作用.结果10μmol・L-1ATRA，2.5mmol・L-1NaPA及两者联合作用，可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的生长，使细胞恶性表型向正常转化，其联合作用组7d

2、抑制率达66.5%，并能明显降低甲胎蛋白的分泌量49.2%，使细胞周期G0/G1期延长58.7%，S期下降35.8%（P<0.05），影响DNA合成，最终产生抑制增殖诱导细胞分化的作用.结论ATRA，NaPA及两者联合应用均可抑制SMMC-7721细胞生长，诱导细胞分化，ATRA和NaPA联合对人肝癌细胞的诱导分化有协同作用.　　Key;hep-atocellularcarcinoma;celldifferentiation;AFP　　Abstract:AIMToinvestigatetheeffectsofal

3、l-transretinoicacidinbinationonhu-manhepatocellularcarcinoma（HCC）celllineSMMC-7721.METHODSHCCcelllineseparatelyandbothagentsinbiningmannerrespectively.Themorphologicandfunc-tionalchangesofthecelllineetricanalysis，imageanalysisandAFP　measurement.RESULTSSingleall-

4、transretinoicacidorphenylacetenatriumcouldinhibitetheproliferationofhumanHCCcellline（SMMC-7721），eeffect.AfterSMMC-7721cellsentofbothagentsfor7d，thesuppressionratealignantphenotypeofthecelllinegraduallydisappearedaturecelleofAFPoresignificantlythananyotheragent.　

5、　0引言　　肿瘤细胞诱导分化是肿瘤治疗研究的新途径，通过诱导可使其分化为正常或接近正常细胞［1］.分化诱导剂维甲酸毒副作用较大，长期用药易产生耐药性，因此与其他抗肿瘤药物或诱导剂联合作用，增加疗效降低用药量，日益引起人们的重视.我们探讨了全反式维甲酸（all-transretinoicacid，ATRA）和苯乙酸钠（phenylacetenatrium，NaPA）联合作用对人肝癌（HCC）细胞的诱导作用，为寻找高效低毒的分化诱导剂及为探讨诱导剂的联合作用效果及其机制提供实验依据.　　1材料和方法　　1.1材料ATRA购

6、自Sigma公司，NaPA及RP-MI1640购自Haclone公司，100mL・L-1小牛血清购自杭州四季清公司，MTT及胰酶购自宝泰克公司，甲胎蛋白放免试剂盒由中国原子能科学院提供.人HCC细胞株SMMC-7721第二军医大学建系本室保存.　　1.2方法人HCC细胞株SMMC-7721细胞接种生长在含有100mL・L-1灭活小牛血清pH7.0～7.2的RPMI1640培养基中，37℃恒温密闭培养.用2.5g・L-1胰蛋白酶和0.2g・L-1EDTA的混合液消化

7、单层细胞，制成细胞悬液，计数后备用.ATRA和NaPA分别溶于无水乙醇中，浓度分别为0.45μmol・L-1和0.22μmol・L-1.采用微孔滤过膜双层过滤除菌，避光保存备用.接种细胞预培养12h使悬浮细胞贴壁，然后换以新的培养液，使ATRA和NaPA达到所需的浓度.实验分为:空白对照组，实验组分10μmol・L-1ATRA处理组，2.5mmol・L-1NaPA处理组，联合处理组.以上各组均含终体积分数为0.17mL・L-1的乙醇.对照组及处理组细

8、胞经作用后，胰酶消化，PBS洗涤、离心，30g・L-1戊二醛固定，于光镜及电镜下观察细胞形态.细胞接种于培养瓶中约108・L-1，培养24h后换含受试物的培养液，培养1）.细胞以108・L-1接种于25mL培养瓶中，24h后换含受试物的培养液，每日收集实验组和对照组细胞培养液，4000r&