全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化作用论文

《全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化作用论文.freelolL-1ATRA，2.5mmolL-1NaPA及两者联合作用，可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的生长，使细胞恶性表型向正常转化，其联合作用组7d抑制率达66.5%，并能明显降低甲胎蛋白的分泌量49.2%，使细胞周期G0/G1期延长58.7%，S期下降35.8%（P0.05）.freel;hep-atocellularcarcinoma;celldifferentiation;AFPAbstract:AIMToinvestigatetheeffectsofall-transreti

2、noicacidinbinationonhu-manhepatocellularcarcinoma（HCC）celllineSMMC-7721.METHODSHCCcelllineseparatelyandbothagentsinbiningmannerrespectively.Themorphologicandfunc-tionalchangesofthecelllineetricanalysis，imageanalysisandAFPmeasurement.RESULTSSingleall-transretinoicacidorphenylaceten

3、atriumcouldinhibitetheproliferationofhumanHCCcellline（SMMC-7721），eeffect.AfterSMMC-7721cellsentofbothagentsfor7d，thesuppressionratealignantphenotypeofthecelllinegraduallydisappearedaturecelleofAFPoresignificantlythananyotheragent.0引言肿瘤细胞诱导分化是肿瘤治疗研究的新途径，通过诱导可使其分化为正常或接近正常细胞［1］.分化诱导剂

4、维甲酸毒副作用较大，长期用药易产生耐药性，因此与其他抗肿瘤药物或诱导剂联合作用，增加疗效降低用药量，日益引起人们的重视.我们探讨了全反式维甲酸（all-transretinoicacid，ATRA）和苯乙酸钠（phenylacetenatrium，NaPA）联合作用对人肝癌（HCC）细胞的诱导作用，为寻找高效低毒的分化诱导剂及为探讨诱导剂的联合作用效果及其机制提供实验依据.1材料和方法1.1材料ATRA购自Sigma公司，NaPA及RP-MI1640购自Haclone公司，100mLL-1小牛血清购自杭州四季清公司，MTT及胰酶购自宝泰克公司，甲胎蛋白放免

5、试剂盒由中国原子能科学院提供.人HCC细胞株SMMC-7721第二军医大学建系本室保存.1.2方法人HCC细胞株SMMC-7721细胞接种生长在含有100mLL-1灭活小牛血清pH7.0～7.2的RPMI1640培养基中，37℃恒温密闭培养.用2.5gL-1胰蛋白酶和0.2gL-1EDTA的混合液消化单层细胞，制成细胞悬液，计数后备用.ATRA和NaPA分别溶于无水乙醇中，浓度分别为0.45μmolL-1和0.22μmolL-1.采用微孔滤过膜双层过滤除菌，避光保存备用.接种细胞预培养12h使悬浮细胞贴壁，然后换以新的培养液，使ATRA和NaPA达到所需的

6、浓度.实验分为:空白对照组，实验组分10μmolL-1ATRA处理组，2.5mmolL-1NaPA处理组，联合处理组.以上各组均含终体积分数为0.17mLL-1的乙醇.对照组及处理组细胞经作用后，胰酶消化，PBS洗涤、离心，30gL-1戊二醛固定，于光镜及电镜下观察细胞形态.细胞接种于培养瓶中约108L-1，培养24h后换含受试物的培养液，培养1）.细胞以108L-1接种于25mL培养瓶中，24h后换含受试物的培养液，每日收集实验组和对照组细胞培养液，4000rmin-1冰冻离心5min，取上清液冻干浓缩后作AFP测定，AFP的测定采用放射免疫测定法，按试

7、剂盒说明书进行，计算1×106个细胞AFP的分泌量.SMMC-7721细胞经不同实验组处理后，经胰酶消化，700mLL-1乙醇固定，加PI50mgL-1染色，流式细胞仪分析细胞周期.2结果2.1形态学观察经ATRA和NaPA作用后细胞胞体突触受抑制，细胞大多呈圆形成椭圆形，形态相对规则，对照组细胞则呈多形性.细胞多散在生长，堆集现象减少，培养6d可有胞质空泡出现，细胞逐渐老化.电镜观察显示处理后细胞胞核变得相对规则，呈圆形或卵圆形，核膜平整，未见深切迹，多数细胞仅有一个核仁，染色质变得细而分散.细胞质相对增多，细胞器发达，分泌泡增多.细胞膜较对照组相对规则

8、，微绒毛变化不明显.2.2细胞生长SMMC-7721细胞经10μm