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1、2,3吲哚醌诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡作用及机制【摘要】目的观察2,3?吲哚醌（ISA）经Caspase?3途径诱导人神经母细胞瘤凋亡的作用及机制。方法以不同浓度ISA（0、100、200、400umol/L）作用于SH7SY5Y细胞48h,采用Hocehst33258/PI荧光染色技术观察细胞凋亡的形态学改变，流式细胞术检测细胞凋亡率的变化，Westernblot方法检测Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂（ICAD）蛋白表达的变化。结果Hochest33258/PI荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡形态学特征。100、200、400nmol/LI
2、SA处理组SH?SY5Y细胞的凋亡率均明显高于对照组（F=，P细胞永生化是肿瘤形成的一个重要原因，而细胞凋亡失控又是造成细胞永生化的直接原因因此，抑制肿瘤细胞生长的机制，主要是诱导肿瘤细胞凋亡，而Caspase和Bcl?2家族蛋白与细胞凋亡密切相关［4］，尤其是bcl?2/bax降低，可引起线粒体膜电位的改变［5］，进一步激活Caspase?3诱导细胞发生凋亡。有研宄报道，Caspase?3在神经母细胞瘤中高度表达，并且其高度表达可以诱导神经母细胞瘤凋亡［6,7］。本课题组以往研究显示，ISA作用于SH?SY5Y细胞后，抗凋亡基因bcl?2mRNA表达明显下降，
3、促凋亡基因bax未发现明显改变，bcl?2/bax降低［8］。在凋亡的信号传递中，Caspase?3处于凋亡诱导信号传递、Caspase?3级联反应、下游效应因子作用这一凋亡过程中的中心位置，它是细胞程序性死亡的最终执行者。激活的Caspase?3可以水解包括细胞调节、细胞信号传导、DNA修复等环节中重要的蛋白，从而使细胞表现为凋亡特有的形态学及生化特征。在正常情况下，Caspase?3是以无活性的酶原形式存在于细胞浆中，只有当Caspase?3被上游的Caspase激活后，才能生成活化Caspase?3亚基，同时水解其下游的底物，最终有规律地切断DNA。本实验
4、通过荧光染色观察到，400umol/LISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变：胞体缩小，细胞质浓缩，核染色质聚集，并有DNA碎片；SH?SY5Y细胞经0、100、200、400nmol/LISA处理后，DNA直方图上出现明显的亚G1峰，凋亡率逐渐增加，呈明显的浓度依赖性。另外，本实验用流式细胞仪检测Caspase?3的活化率，Westernblot检测其下游底物的改变，结果显示，表达活化的Caspase?3的细胞数随药物浓度的升高逐渐增加，而其下游作用底物ICAD的蛋白表达量逐渐下降。由此推测，ISA作用于SH7SY5Y细胞可能通过降低Bcl?2/Bax比值来改变
5、线粒体膜电位，启动细胞色素C的释放，细胞色素C与Caspase?9、Apaf?l结合形成复合物，激活Caspase?9，最终将信号传导到下游的Caspase?3，促进Caspase?3活化，触发凋亡。综上所述，ISA在诱导SH?SY5Y细胞凋亡的过程中，激活Caspase?3,活化的Caspase?3对凋亡的发生及调节发挥着重要作用。但是，肿瘤的形成是多因素作用的结果，而抑制肿瘤细胞增殖的机制也是多方面的，因此ISA的抗癌机制有待于进一步研究。【参考文献】[1]IGOSHEVAN,LORZC，O'CONNERE,eta1.Isatin,anendogenousm
6、onoamineoxidaseinhibitor,triggersadose?andtime?dependentswitchfromapoptosistonecrosisinhumanneuroblastomace11s[J].Neurochemint,2017,47(3):216?224.[2]祝兆怡，侯琳，鞠传霞，等.2,3?吲哚醒对人神经母细胞瘤SH2SY5Y细胞增殖影响[J].青岛大学医学院学报，2017,43(2):128?131.[3]鞠传霞，侯琳，孙福生，等.2,3?吲哚醌对血管内皮细胞生长因子的影响及作用机制研究[J].中国药房，2017,17(
7、24):1851?1853.[4]高彬昌，孙立荣.尼莫地平对HL?60细胞凋亡的影响及其机制[J].齐鲁医学杂志，2017,21(1):14?16.[3]ZHENGXL,SUNHX,LIUXL,etai.AstilbicacidinducedC0L0205cellapoptosisbyregulatingBcl?2andBaxexpressionandactivatingcaspase?3[J].ActaPharmacolSin,2017,25(8):1090?1095.[4]王家祥，梁旭东，刘秋亮，等.神经母细胞瘤组织中TRAIL、Caspase?3的表达[J
8、].JZhengzhou
