吲哚美辛对视网膜母细胞瘤y79细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文吲哚美辛对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究姓名：张英申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：李文生2012-05-17温卅I医学院硕士学位论文吲哚美辛对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究中文摘要目的：观察环氧化酶抑制剂吲哚美辛(indomethacin，IN)对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响，并检测IN作用前后Y79细胞内survivin、[3-catenin、Bcl一2mRNA表达的调控作用及survivin、[3-catenin、N

2、F—vd3p65、pAkt(phosphorylatedAkt)、tAkt(totalAkt)蛋白的表达，探讨IN对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖及凋亡的作用机制。方法：体外培养Y79细胞，应用不同浓度IN作用Y79细胞24h后，CCK．8法检测不同浓度IN对Y79细胞增殖活性的影响；TUNEL法检测IN对Y79细胞凋亡的影响；逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)检测不同浓度IN作用Y79细胞24h后内细胞凋亡抑制因子(survivin)、13-catenin、B细胞淋巴瘤／白血病．2(Bcl．2)mRNA表达的

3、调节作用；酶链免疫吸附测定(ELISA)检测不同浓度IN对Y79细胞内survivin蛋白表达的影响；Westernblot检测细胞核内13-catenin、核转录因子1cBp65(NF—r,Bp65)、pAkt(phosphorylatedAkt)、tAkt(totalAkt)蛋白的表达。结果：终浓度为25～400I．tmol／L的IN处理组与阴性对照组(0lxmol／L)相比较，对Y79细胞增殖有明显的抑制作用，其抑制率呈浓度．时间依赖性(24h：F=11．883，P=0．000：48h：F=36．222

4、，P=0．000；24h与48h：F=10167，P=0．033)；各浓度IN处理组均可见TUNEL阳性的绿色荧光凋亡细胞，高浓度IN组(100，200，400pmol／L)活细胞数量较阴性对照组减少，出现核碎片：IN处理Y79细胞后，细胞内13-catenin、Bcl-2mRNA的表达均呈浓度依赖性下降(13-catenin：F=14．835，P=0．000；Bcl一2：F=20．497，P=0．000)，而survivinmRNA的表达与阴性对照组相比较差异无统计学意义(P>0．05)；ELISA显示IN

5、能诱导细胞内survivin蛋白表达下降，呈浓度依赖性(F=67．633，P=0．000)：Westernblot结果显示：13-catenin和NF．1cBp65蛋白均呈浓度依赖性下降(p-catenin：F=37．411，P=0．000；NF．1d3p65：F=16．302，P=0．000)；pAkt蛋白的表达亦成浓度依赖性下降(F=27．700，P=0．000)，而俄kt蛋白的表达未见明显变化(P>O．05)。温州医学院硕士学位论文结论：IN对视网膜母细胞瘤Y79细胞株具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作

6、用，其作用机制可能是通过参与Akt／PKB、Wnt／[3-catenin以及NF-v．B三条细胞内信号通路来调控各种靶基因的表达，进而抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，从而发挥抗肿瘤的作用。关键词：吲哚美辛；视网膜母细胞瘤；细胞增殖；细胞凋亡；细胞信号通路温州医学院硕士学位论文Inhibitionofproliferationandinductionofapoptosisinhumanretinoblastomacellsbyindomethacinthroughaprocessthatinvolvesattenu

7、atingtheAkt／PKB，Wnt／[；-cateninandNF—KBsignalingpathwaysAbstractobjective：Toinvestigatewhetherindomethacin(IN、caninhibittheproliferationandinduceapoptosisofhumanretinoblastomacelllines(Y79)andtofurtherelucidatethemolecularmechanismoftheiractions．Methods：Cell

8、CountingKit-8(CCK-8)wascarriedoutaftertreatingY79cellswithvariousconcentrations(0，25，50，100，200，400gmol／L)ofINfor24hoursor48hours．Cellapoptosiswasassessedbyterminaldeoxynucleotidy1transferase-mediatedu