胰蛋白酶的提取论文

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1、学校代码：10128学号：化学产品工程结课论文题目:胰蛋白酶的提取姓名:班级:二零一三年■—月第1章产品提出21」胰蛋白酶21.2作用与用途2第2章方案42」化胰蛋白酶的提取原理和方法步骤42.1.1原理42.1.2试剂和器材42.1.3方法和步骤52.1.3.1胰蛋白酶原的提取5第3章选择方案73」方案选择7第4章产品生产94.1胰蛋白酶的制备94」.1原理固定培养发酵94.1.2液体深层发酵9第1章产品提出1.1胰蛋白酶胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)为蛋白酶的一种,EC3.4.21.4。

2、在脊椎动物屮，作为消化酶而起作用。在胰脏是作为酶的前体胰蛋口酶原而被合成的。作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的竣基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋口酶原、竣肽酶原、磷脂酶原等其它酶的而体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量23800E1],活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。除存在于脊椎动物外，还存在于蚕、

3、海盘车、蝴姑、放线菌等范围广泛的生物体屮。另外与高等动物的血液凝固和炎胰蛋白酶降解物分析。症等有关的凝血酶、纤溶酶、舒血管素等蛋口酶在化学结构和特异性等方面与胰蛋白酶具有密切的关系，可以认为这些酶是从共同的祖先酶在进化过程中分化而来的。胰糜蛋白酶与弹性蛋白酶在结构和催化机制方面也具有密切关系，但其特异性则完全不同。胰蛋白酶系自牛、羊或猪胰屮提取的一种蛋白水解酶。屮国药品标准规定按干燥品计算，每lmg的效价不得少于2500单位。由牛、羊、猪胰脏捉取而得的一种肽链内切酶，只断裂赖氨酸或精氨酸的竣基参与形成的肽

4、键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醴。分子量24000,pT10.5,最适pH值7.8〜8.5左右。pH>9.0不可逆失活。52+对酶活性有稳定作用；重金屈离子、冇机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制剂对其活性有强烈抑制。临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。1.2作用与用途本品为蛋门质水解酶，能选择地水解蛋门质中由赖氨酸或精氨酸的竣基所构成的肽链，能消化溶解变性蛋质，对未变性的蛋白质无作用，因此，能使脓、痰液、血凝块等分解、变稀，易于引流排除，加速创面净

5、化，促进肉芽组织新生，此外还有抗炎症作用。临床上用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、痿管等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等。喷雾吸入，用于呼吸道疾病。也可用于治疗毒蛇咬伤。还常用于动物细胞培养前对组织的处理。胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与具浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37°C吋，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋

6、口质町降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含C&2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终I上胰酶对细胞的作用。第2章方案2.1化胰蛋白酶的提取原理和方法步骤在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外叨种与胰蛋口酶性质相似的蛋白水解酶：朕凝乳蛋口酶和弹性蛋口酶。在朕蛋口酶提取过程中，三者彼此很难分开。需采用合适的方法进一步分离纯化。2.1.1原理在动物胰脏中除了存在胰蛋白酶外，还有另外两种与胰蛋片酶性质相似的蛋白水解酶：胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶。在胰蛋

7、白酶提取过程中，三者彼此很难分开。需采用合适的方法进-步分离纯化。从动物胰脏中提取胰蛋门酶，一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋口酶原提取出来，然后根拯等电点沉淀的原理将提取液的pH值调至酸性（pH3.0左右）,使大量的酸性蛋白沉淀出来。经硫酸钱分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀。沉淀物经水溶解并调至PH8.0,用极少量的膜蛋白酶将膜蛋白酶原激活，同吋溶液屮的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活，三利帼原相互作用过程如下:箱生白■原—

8、—六駄MK91S白MF原+

9、膜爱白■白・弹性■白弹性

10、愛白・也可采用从胰脏小提取出胰蛋口酶原，利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋口酶原部分自溶，并通过溶液中32+的坏境，使胰蛋口酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活，转变为具有活性的胰蛋白酶（胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶）。激活后的酶溶液再进一步分离纯化。2.1.2试剂和器材2.1.2.1试剂(1)pI12.5〜3.0乙酸化的水溶液(2)10%(体积分数)乙酸(3)2mol/L硫酸(4)固体