大豆胰蛋白酶抑制因子的分离纯化-论文.pdf

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1、第32卷第1期大豆科学V0】．32No．12013矩2月SOYBEANSCIENCEFeb．2013大豆胰蛋白酶抑制因子的分离纯化谷春梅，韩玲玲，曲洪生，宋鑫秀，赵琳琳，潘姝，秦贵信(1．吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林长春130118；2．吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118)摘要：以脱脂豆粉为原料，经pH7．6磷酸溶液抽提、65~C热变性、硫酸铵分步沉淀等提取技术制备粗提液，之后再经过DEAE-52离子交换、亲和层析和葡聚糖凝胶过滤等纯化技术研究大豆胰蛋白酶抑制因子的分离纯化方法。结果表明，从脱

2、脂豆粉中分离纯化的大豆胰蛋白酶抑制因子的比活力高达4600U·mg～，提纯倍数为73．85。纯化的大豆胰蛋白酶抑制因子经SDS—PAGE电泳分析，呈现2条谱带，分子量分别为21．92和2O．04kDa，这2种蛋白均为大豆胰蛋白酶抑制因子。该法操作简便，分离纯化效果好，对大豆胰蛋白酶抑制因子的研究与生产有重要的参考价值。关键词：大豆；胰蛋白酶抑制因子；分离；提取；纯化中图分类号：$816．4文献标识码：A文章编号：1000．9841(2013)01-0089-04ExtractionandPurificationofS

3、oybeanTrypsinInhibitorGUChun—mei，HANLing—ling，QUHong—sheng，SONGXin—xiu，ZHAOLin．1in，PANShu’，QINGui．xin(1．CollegeofFoodScienceandEngineering，JilinAculturalUniversity，Changchun130118；2．CollegeofAnimalScienceandTechnology，JilinAgricul—turalUniversity，Changchun13011

4、8，Jilin，China)Abstract：Inthispaper，soybeanmealwasusedasrawmateria1．Thecrudeextractofthesoybeantrypsininhibitor(STI)wasobtainedbytheextractionofphosphoricacidbufer(pH7．6)，thermaldenaturation(65~C)andammoniumsulfateprecipitati—on．ThenthisextractwaspurifiedbyDE-52

5、ionexchange，affinitychromatographyandsephadexG-75gelfiltration．Theresultsshowedthatthespecificactivityofsoybeantrypsininhibitorreached4600U·mg～andpurificationfactorof73．85wasob-tained．ThepurifiedSTIgavetwoproteinbandsinSDS—PAGEelectrophoresis．Itsmolecularweight

6、swereestimatedtobe21．92and20．04kDa．Duetotheeaseandsimplenessoftheprocedureandhighefficiency．themethodhasanimpo~antrefer·encevaluetoresearchandproductionofsoybeantrypsininhibitor．Keywords：Soybean；Trypsininhibitor；Seperation；Extraction；Purification自1917年Osborne和M

7、endd_j首次发现大豆度低。由于胰蛋白酶抑制因子在营养、医学以及农中含有对动物消化、吸收和利用不利的成分以来，业等领域具有广泛的应用前景。，许多研究人员许多学者便开始了大豆抗营养因子的研究，发现积极探索效率更高的ST1分离纯化方法，如国外学1O余种抗营养因子。J。各种抗营养因子在大豆中者Kortt等和Macedo等¨利用胰蛋白酶抑制因的含量不同，而且抗营养作用也存在差异。其中大子可抑制胰蛋白酶的专一性，分别从Acaciaelata和豆胰蛋白酶抑制因子(Soybeantrypsininhibitor，STI)Dimo

8、rphandramollis中纯化出纯度较高的大豆胰蛋是主要抗营养因子，属于多肽类或蛋白质，由72—白酶抑制因子；国内学者陈星等¨采用固定化酶197个氨基酸残基组成，分子质量为6000～21500法，得到纯化倍数为324．6的胰蛋白酶抑制因子。Da_4J，约有7～10种，目前研究较为广泛的只有本研究在总结前人经验基础上，采用胰蛋白酶固定2种，即