大豆胰蛋白酶抑制剂对南极磷虾类胰蛋白酶的抑制动力学-论文.pdf

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1、中国水产科学2012年7月，19(4)：635-640JournalofFisherySciencesofChina研究论文DoI：10．3724／SP．J．1118．2012．00635大豆胰蛋白酶抑制剂对南极磷虾类胰蛋白酶的抑制动力学杭虞杰，李学英，杨宪时，迟海，郭全友1．中国水产科学研究院东海水产研究所，上海，200090；2．上海理工大学医疗器械与食品学院，上海，200093摘要：为了探讨大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对南极磷虾(Euphausiasuperba)类胰蛋白酶的抑制动力学，采用邹氏不可逆抑制动力学法，测定了STI对该

2、酶的微观速度常数。结果表明：南极磷虾类胰蛋白酶的，m和分别为0．155mmol／L，8．44~tmol／(L-min)。酶活力随着STI溶液浓度增大而减小，其Ic50约为2-8~tg／mL；低浓度的STI溶液对酶的抑制作用为竞争性慢可逆抑制。正向微观速度常数0为0．184mmol／(L·rain)，逆向微观速度常数0为0．0394rain-，随着STI溶液浓度的逐渐增大，该酶最终将完全失活。本研究旨为该酶的抑制技术研究提供实验数据。关键词：南极磷虾；抑制动力学；大豆胰蛋白酶抑制剂；类胰蛋白酶中图分类号：Q946．5文献标志码：A文章编号

3、：1005—8737一(2012)04—0635—06南极磷虾(Euphausiasuperba)作为南大洋最酶[11-13]的一些基本性质已做了比较详尽的研究。大的单种生物资源，是海洋浮游动物中重要的物关于南极磷虾类胰蛋白酶抑制方面，只涉及部分种之一，是企鹅、海豹、鲸类等食物链高层捕食抑制剂对类胰蛋白酶活性的影响[11，而未从微观者的重要食物来源⋯。除作为南大洋生态系统中角度进行抑制动力学方面的研究。本研究立足于的关键生物之外，也因其巨大的生物量和潜在的邹氏不可逆抑制动力学方法¨引，测定了南极磷虾渔业资源日益受到人们的关注L2aJ，然

4、而南极磷类胰蛋白酶的米氏常数，研究了大豆胰蛋白酶虾体内蛋白酶活力很强[4-6]，南极磷虾死后自溶抑制剂对类胰蛋白酶的抑制动力学，建立了酶在很快，甚至在一l8℃以下也有较强的自溶能力[。STI溶液中抑制作用的动力学模型，并测定游离南极磷虾这种快速自溶的能力引起了较广泛的关酶的微观速度常数，旨为该酶的抑制技术研究以注，很多学者对南极磷虾自溶的原因进行了分析及进一步开发利用提供实验数据。研究。Konagaya等【6]研究了南极磷虾蛋白酶对其1材料与方法自溶因素的影响，认为蛋白酶可能对南极磷虾品质变化起主要作用。Yukio等[8]研究发现，南极

5、磷1．1材料虾蛋白酶中的类胰蛋白酶活性很高，并且南极磷南极磷虾由我国“南极海洋生物资源开发利虾的自溶主要是类胰蛋白酶作用的结果。Osnes用项目组”于2011年1月南极FAO48．1区捕捞，等L9J研究发现类胰蛋白酶对南极磷虾自溶起到船上冻结后一23℃冻藏，一18℃条件下于20l1年440％的作用。月运抵实验室后，在一28℃贮藏备用。南极磷虾类国内外对南极磷虾自溶酶[加]、类胰蛋白胰蛋白酶由本实验室从南极磷虾中分离提纯而来。收稿日期：2011-09—12；修订日期：2011—11—09．基金项目：国家“863”计划项目(2011AA09

6、2011AA090801)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(中国水产科学研究院东海水产研究所)资助项目(2011T05)．作者简介：杭虞杰(1986一)，男，硕士，研究方向为食品化学与食品质量安全控制．E-mail：greenbreath@qq．tom通信作者：杨宪时，研究员．E—mail：xianshiyang@126．com636中国水产科学第19卷1．2实验试剂与仪器0．6mmol／L、0．4mmol／L、0．2mmol／L，在50℃、主要试剂：大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)、NapH8．0条件下反应，测其酶活力。以Li

7、neweaver—苯甲酰一DL一精氨酸一对硝基酰胺盐酸盐(BApNA)Buck作图，经线性拟合得到方程Y=18．421x+均为美国sigma公司产品，其他试剂皆为国产分118．47，计算得到南极磷虾类胰蛋白酶的动力学析纯。参数：Km=0．155mmol／L，=8．44~tmol／(L·min)。主要仪器：5810R高速冷冻离心机，Eppendorf,米氏常数反应了酶和底物的亲和力，南极磷德国；ALPHA1-2LDPLUS冷冻干燥机，Christ，虾类胰蛋白酶Km=O．155mmol／L，说明其与底物德国：BS一1OOA自动部分收集器、B

8、T01．100蠕动BApNA的亲和力较高。泵，上海精科实业有限公司；PowerwaveXS酶标仪，Biotek，美国；DS．1高速组织捣碎机，上海精科实业有限公司；FA1004A电子天平，上海精天电子仪器有