鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的提取工艺研究论文

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1、鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的提取工艺研究论文付煊赫，刘同祥，张宗申，王继峰【摘要】目的研究鹰嘴豆中胰蛋白酶抑制剂的最佳提取条件。方法以提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标，采用正交实验法对提取温度(A)、溶剂用量(B)、pH值(C)、提取时间(D)4个因素进行优选，并对优选的提取方案进行验证。结果在所选水平范围内，因素C和B对提取效果有显著的影响，因素D和A影响不显著。结论该文属国内首次关于鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂成分的研究报告.freelizetheextractionprocedureoftrypsininhibitorfromCicerar

2、ietinumL.．MethodsTheinhibitionrateoftrypsinactivityeter,andthenoptimizethefourfactorsincludingtemperatureofextractionsolution(A),volumeofextractionsolution(B),pHvalueofextractionsolution(C)andtimeofextraction(D),thereafter,practisetheoptimalprocedure.ResultsFactorsCan

3、dBdisplayedthemostsignificanteffectontheextraction,andFactorsDandAcamethenext.ConclusionForthefirsttime,entedtheidentificationofTIanditsextractionprocedurefromCicerarietinumL.,andtheoptimalextractionprocedureeter.KeyL.;Trypsininhibitor;orthogonaldesign胰蛋白酶抑制剂(Trypsini

4、nhibitor,TI)除了在临床上用来治疗急性胰腺炎、肺气肿、脑水肿和脑缺血外，目前还发现它在HIV和肿瘤的治疗中也有重要意义［1］。化学合成的TI生物利用度低、副作用大以及产生耐药性等缺点，植物来源的TI具有兼容性好、安全和特殊的药物特性等优点。鹰嘴豆CicerarietinumL.产量居世界豆类第3位［2,3］，在我国新疆地区大量种植。本文发现鹰嘴豆中也含有丰富的TI，然后对其提取分离工艺进行了优化，本结果对开发新的植物TI具有重要意义。1器材1.1试剂和材料鹰嘴豆CicerarietinumL.购于新疆农场，胰蛋白酶(北京

5、麒麟宏伟公司)，大豆蛋白酶抑制剂和苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺(上海三杰生物技术有限公司)，其它试剂均为国产分析纯。1.2仪器可见光分光光度计、高速冰冻离心机、精密pH计、数显恒温水浴锅、索氏提取仪等。2方法2.1鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的抑制率测定方法参考杜旭东等［4，5］的苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺(BAPNA)法。2.2鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的制备鹰嘴豆经手工脱皮、30℃下烘干、粉碎、索式提取仪脱脂后，于4℃冰箱中保存备用。2.3各因素最佳范围的确定2.3.1最适提取液体积的确定分别以20，30，40，50，60和70倍(in-

6、1离心15min，上清液经减压浓缩到一定体积后，测定其对胰蛋白酶活性的抑制作用。结果如图1所示，随着提取液体积比的增大，对胰蛋白酶的抑制率也升高，到40倍体积比后抑制率不再上升，表明TI完全浸出。2.3.2最适pH值的确定在20℃下按1∶40体积比，调节pH值分别为4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，提取2h后，余下步骤与“2.3.1”项所述一致。结果如图2所示，在pH值为4.0和7.0时的TI抑制率最大。由于在酸性溶液浸提时浸提液澄清，能除掉较多的杂蛋白，故在后续实验中采用酸性提取。2.3.3最适提取时间的确定在20℃下按1

7、∶40体积比，调pH为4.0，分别浸提1.5，2.5，3.5，4.5，5.5h后，余下步骤按“2.3.1”项所述进行。结果（见图3）表明，随着时间的延长，提取液对胰蛋白酶的抑制率上升，当达到3.5h后达到最大值，表明已经提取完全。2.3.4最适提取温度的确定按1∶40体积比，调pH为4.0，分别在20，35，50，65，80℃水浴下浸提3.5h，余下步骤与“2.3.1”项一致。结果表明，在20～35℃时提取液对胰蛋白酶的抑制率上升，35℃左右时达到最大。2.4各因素影响下最优提取条件的确定2.4.1鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂提取的正交实

8、验设计根据单因素水平确定的条件范围，称取5g脱脂鹰嘴豆粉，在平行操作条件下，选用L9(34)正交实验表进行提取实验，以胰蛋白酶活性大小为指标，进行9次实验，每次实验重复3次(正交因素、水平见表1)。表1因素水平（略）2.4.2结果与方差分析见表2～