胰蛋白酶抑制剂的研究进展

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1、胰蛋白酶抑制剂的研究进展谭竹钧，沈明才，张峰,胡华平（T东工业大学轻工化工学院，广东广州510090）摘要:胰蛋白酶抑制剂是对胰蛋白酶具有抑制作用的一类物质•综述了近几年來，用不同原料制备胰蛋白酶抑制剂的研究进展及临床应用.尖键词:胰蛋口酶抑制剂;基因工程;治疗疾病中图分类号：1Q464.7文献标识码：A文章编号：100727162（2007）033）0062）5收稿日期：2006212228基金项目：广东工业大学人才基金资助项目（052056）;广东省自然科学基金资助项目（04010984）作者简介:谭竹钧（19552），男，教授，

2、主要研究方向为主物化学制药.胰蛋白嗨抑制剂（TD是对胰蛋白酶具有抑制作用的一类物质•最早是由Kunitz从牛胰腺中提取笊胰蛋白酶抑制剂，现在发现在动物、植物、微生物中都广泛存在，并且不同來源的胰蛋白酶抑制剂具有不同的相对分子质量、氨基酸组成、氨基酸序列及分子结构•分子中的活性部位是赖氨酸，抑制作用主雯是与胰蛋白酶等酶的丝氨酸结合，使其失活.在临床广泛用于治疗胰腺炎、休克和脑外科、手术止血等胰蛋白嗨抑制剂通过抑制激肽释放酶以及纤溶酶帀达到止血的目的，能显著减少手术中及手术后病人的出血，临床研究表明其副作用小、安全性好本文对近几年胰蛋白酶

3、抑制剂的制备研究及在医疗屮的应用进行综述.1胰蛋白酶抑制剂的制备1.1从动物脏器中提取牛肺胰蛋白酚抑制剂（也称抑肽酶）的分子质量为612XI05u,是由58个氨基酸残基组成的碱性多肽•它的一级结构和二级结构均已阐明，分子内有3对二硫键，整个分子呈梨型，活性屮心为赖氨酸，位于分子的顶端•从分子质量看有两类，一类是分子质量较大的;一类是分子质量较小的•宋扬等⑵将化学改性与修饰壳聚糖体,共价偶联配基牛胰蛋白酶，制成固定化酶为抑肽酶亲和吸附剂,直接对黄牛肺提取液一步层析纯化，再超滤脱盐、浓缩、去热原,冻干即抑肽酶•抑肽酶比活517XkU/mg

4、,收率22XI04kU/kg件肺）；固定化嗨单位活力21595X103kU/g（干），酶活性回收率55%，非特异性吸附较小，机械强度高，可反复使用.王增禄等⑶设计胰脏多腮联产实验对胰蛋白嗨抑制剂进行了探讨•制备了Trypsin2Sephaiose4B亲和层析柱採用硫酸讓、三氯酹酸沉淀，离心、色谱、冷冻干燥等技术，对猪胰脏中胰蛋白酶抑制剂进行分离纯化，用1kg胰脏制得15mg胰蛋白酚抑制剂，嗨比活为21089XIkU/mg蛋白.Kishinura等⑷在太平洋褶柔鱼（Todam2〃列沁⑸的肝脏中分离得到一种分子质量为63X10'u的TL并

5、研究了其稳定性、氨基酸组成以及抑制作用的特点等,发现该TI対酸、热稳定,能有效抑制胰蛋白酶，并可抑制肌原纤维自身的溶解.Jung等15'在鏗鱼（Katsuwonuspeleanis）的卵中提取分离获得一种分子质量为39X103u的TI,其在体内以二聚体的形式存在，在pH410〜1010有活性，当温度高于40°C时较大程度失活;在不同金属离子如KNa+、Mg»、C产存在时其活性增强，而C『茁勺存在却导致失活.JolantaKowalska等⑷从成熟的CycIanthempe2data屮提取了CyPTII2/II7种新型的胰蛋白酶抑制剂

6、，它们包含28〜30个氨基酸，分子质量31031X10’〜31367Xltfu,这7种抑制剂都强烈抑制牛胰蛋白酶，而对牛糜蛋白酶抑制则很弱.112从人尿中提取人尿胰蛋白酶抑制剂（HUTD是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，表观分子质量为67XI03u,等电点为2〜3.它是一种糖蛋白，糖的质量分数高达20%〜30%.人尿屮的抑肽酶不同于由牛肺、胰提取的抑肽胸，它对人体不产生抗原抗体反应,更适于临床.目前提取UTI的方法有综合使用三氯醋酸、硫酸钱、甲醇沉淀法⑺，使用膨润土法⑻，使用DEAE■纤维素法⑵，便用固定化胰蛋白嗨的方法，直至最近使用的脱乙臥

7、壳多糖以及硅酸镁的方法.范俊虎等（

8、利用纯胰蛋白酶作为配体偶联于CNBr2Sephaiose4B为亲和载体，在不同条件下洗脱亲和蛋白，可从粗品溶液屮快速分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的两种纯产物•根据洗脱条件,可将有抑制活性的20XI"和40XI03u蛋白质分离为两个单独组分或混合物.其中20XI03u组分的抑制活性回收率为35%,抑制比活为31387XIO'kU/mg;40X10-u组分的相应值分别为53%和31116XltfkU/mg混合物的抑制活性回收率和抑制比活分别为89%和31076XI03kU/mg孙爱龙等用人尿胰蛋白酶抑制

9、剂的粗品经过超滤，离子交换层析和亲和层析三步纯化,获得人尿胰蛋白酶抑制剂的屮间品，其效价由原来的10U/m或屯化到2240U/mg,比活为2450U/mg蛋白质，活性回收率为58%.汪炬等

10、②通过ZnC胶体沉淀和乙醇沉