鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的提取工艺研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的提取工艺研究作者：付煊赫，刘同祥，张宗申，王继峰【摘要】　　目的研究鹰嘴豆中胰蛋白酶抑制剂的最佳提取条件。方法以提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标，采用正交实验法对提取温度(A)、溶剂用量(B)、pH值(C)、提取时间(D)4个因素进行优选，并对优选的提取方案进行验证。结果在所选水平范围内，因素C和B对提取效果有显著的影响，因素D和A影响不显著。结论该文属国内首

2、次关于鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂成分的研究报告，其有效部位的最佳提取工艺为C1B3D1A3。【关键词】鹰嘴豆　胰蛋白酶抑制剂　正交实验Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractionprocedureoftrypsininhibitorfromCicerarietinumL.．MethodsTheinhibitionrateoftrypsinactivitywasusedasscreeningparameter,andthenoptimizethefourfactorsincludi

3、ngtemperatureofextractionsolution(A),volumeofextractionsolution(B),pHvalueofextractionsolution(C)andtimeofextraction(D),thereafter,practisetheoptimalprocedure.ResultsFactorsCandBdisplayedthemostsignificanteffectontheextraction,andFactorsDandAcamethe课题份量和难易程度

4、要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果thefirsttime,wedocumentedtheidentificationofTIanditsextractionprocedurefromCicerarietinumL.,andtheoptimalextractionprocedurewasC1B3D1Awhentheinh

5、ibitionratiooftrypsinactivitywasconsideredaspreferentialparameter.Keywords：CicerarietinumL.;Trypsininhibitor;orthogonaldesign胰蛋白酶抑制剂(Trypsininhibitor,TI)除了在临床上用来治疗急性胰腺炎、肺气肿、脑水肿和脑缺血外，目前还发现它在HIV和肿瘤的治疗中也有重要意义［1］。化学合成的TI生物利用度低、副作用大以及产生耐药性等缺点，植物来源的TI具有兼容性好、安全和特殊的

6、药物特性等优点。鹰嘴豆CicerarietinumL.产量居世界豆类第3位［2,3］，在我国新疆地区大量种植。本文发现鹰嘴豆中也含有丰富的TI，然后对其提取分离工艺进行了优化，本结果对开发新的植物TI具有重要意义。1器材试剂和材料鹰嘴豆CicerarietinumL.购于新疆农场，胰蛋白酶(北京麒麟宏伟公司)，大豆蛋白酶抑制剂和苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺(上海三杰生物技术有限公司)，其它试剂均为国产分析纯。仪器可见光分光光度计、高速冰冻离心机、精密pH课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生

7、能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果计、数显恒温水浴锅、索氏提取仪等。方法.1鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的抑制率测定方法参考杜旭东等［4，5］的苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺(BAPNA)法。.2鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的制备鹰嘴豆经手工脱皮、30℃下烘干、粉碎、索式提取仪脱脂后，于℃冰箱中保存备用。.3各因素最佳范围的确定.最适提取液体积的确定分别以20，30，40，50

8、，60和70倍(W/V)体积于鹰嘴豆干粉中加蒸馏水，在20℃下提取h。粗提液于℃下10000r·min-1离心1min，上清液经减压浓缩到一定体积后，测定其对胰蛋白酶活性的抑制作用。结果如图1所示，随着提取液体积比的增大，对胰蛋白酶的抑制率也升高，到40倍体积比后抑制率不再上升，表明TI完全浸出。.最适pH值的确定在20℃下按1∶40体积比，调节pH值分别为，，，，，提取h后，余下步骤