超声波法提取大黄胰蛋白酶抑制剂论文

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1、超声波法提取大黄胰蛋白酶抑制剂论文杜旭东，刘同祥，张宗申，牛建昭，王继峰【摘要】目的研究大黄中胰蛋白酶抑制剂活性成分的最佳提取条件。方法以提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标，采用正交实验法对提取溶剂用量(A)、提取温度(B)、提取时间(C)、提取次数(D)4个因素进行优选研究，并以优选出的提取方案进行验证实验。结果因素B，D对提取效果有显著的影响.freelizetheextractionprocedurefortrypsininhibitorfromRheumofficinaleBaill．MethodsTheinhibitionrateoftrypsinactivi

2、tyeter,ployedtheorthogonaldesignmethodtotesttheeffectsoffourfactors,includingvolumeofextractionsolution(A),temperatureofextractionsolution(B),timeofextraction(C)andextractingtimes(D),ontheextractionoftrypsininhibitor,thenaftertoexaminetheoptimizedprocedure.ResultsFactorBandDperformedsi

3、gnificanteffectontheextraction,andFactorCcamenext.ConclusionTheoptimumextractiontechnologyeter.KeyofficinaleBaill；UltrasonicofficinaleBaill为材料，对胰蛋白酶抑制剂的提取条件进行了研究。1器材1.1仪器可见光分光光度计(7202B型上海尤尼柯仪器有限公司)、离心机（LD-4型北京医用离心机厂）、精密pH计（PHS-3型上海雷磁仪器厂）、数显恒温水浴锅（HH-6型江苏金坛荣华仪器制造有限公司）、精密电子天平（FA2004N型上海民桥

4、）、超声波清洗器（KQ-500B型昆山市超声仪器有限公司）。1.2试剂胰蛋白酶(北京麒麟宏伟公司)、大豆蛋白酶抑制剂（国药集团化学试剂有限公司）、苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺（上海三杰生物技术有限公司）、三-羟甲基-氨基甲烷、无水氯化钙、盐酸、三氯乙酸、氢氧化钠等为国产分析纯。2方法与结果2.1大黄胰蛋白酶抑制剂的抑制率测定采用苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺（BAPNA）法［5］：取胰蛋白酶液1ml，加药材提取液1ml在37℃水浴保温5min，加入BAPNA溶液5ml，37℃水浴保温10min后，立即加1ml三氯乙酸（30%）终止反应，用分光光度法在410nm波长条件

5、下测定吸光度。按下列公式计算样品提取液的抑制百分率：i=(Ar-Abr)-(As-Abs)(Ar-Abr)×100%式中：i—抑制百分率，%Ar—标准溶液的吸光度Abr—含标准溶液的空白对照液的吸光度As—样品溶液的吸光度Abs—含样品溶液的空白对照液的吸光度2.2粗提溶剂的选择取磨碎生药5g，在60℃下，分别用双蒸水及10%，30%，50%，70%，90%的乙醇作为提取溶剂进行实验，超声提取2h。结果如图1所示，随着乙醇浓度的增大，提取液对胰蛋白酶活性的抑制率下降，双蒸水效果最好。2.3各因素的最佳范围确定2.3.1最适温度的确定根据上述结果，取磨碎的大黄5g，加

6、双蒸水150ml，分别在10，30，50，70，90℃条件下超声提取2h，过滤、离心后取上清液，减压浓缩到一定体积后测定对胰蛋白酶的抑制率，结果表明在40～50℃范围内提取液对胰蛋白酶活性的抑制率最高。见图2。2.3.2最适体积的确定取磨碎的大黄5g，在60℃下，分别按1∶10，1∶20，1∶30，1∶40（illsp)seeds［J］.JSciFoodAgric，1994，64：87.