大黄中大黄素的提取

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1、大黄中大黄素的提取、分离与鉴定同组人：石春杰黄旭龙陈永潘洋肖娟娟大黄中大黄素的提取、分离与鉴定一实验目的1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法2）掌握PH梯度提取法的原理和操作3）掌握蒽醌类化合物鉴定方法4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法二实验原理大黄为蓼科植物，味苦，性寒，具有泻热通经等功效。其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物，其中大部分为结合的蒽醌，少数为游离的蒽醌。结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基，故呈弱酸性，能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液，但有机溶剂中的溶解度很小。游离的蒽醌容易溶于氯仿

2、、乙醚等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三大黄素甲醚和大黄酚的酸性最弱。根据以上的混合物的酸性差异，可用碱性强弱的不同溶液进行梯度本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃（乙醇或冰醋酸），能升华，其溶解度如下：四氯化碳0.01﹪、氯仿0.07﹪、二硫化碳0.009﹪、乙醚0.14﹪、苯0.041﹪。易容于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水

3、溶液，几乎不溶于水。三实验器材、（1）药品：大黄粗粉，20％硫酸溶液、5％碳酸氢钠溶液、5％碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶板、石油醚、大黄素标准品等。（2）回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、蒸发皿、真空泵、抽滤瓶、铁架台等。四实验内容（1）酸水解：用天平称取大黄粉10g,放置500ml烧杯中，加20﹪H2SO4水溶液100ml，直火加热1小时，用布氏漏斗抽滤，滤饼水洗后于70℃左右干燥。溶液沸腾是关闭电源，不沸腾再打开，注意不要烧干。大黄粉从土黄色变为黑色。（2）总羟基蒽醌苷元的提取：

4、滤饼经干燥后，置索氏提取器中，加入乙醚150ml，回流提取2小时，得乙醚提取液。乙醚提取液经薄层色谱检查有大黄酸、芦荟大黄素，大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。包办为硅胶板，展开剂为石油醚（沸程为60—90℃）-乙酸乙酯（7:3），进水平或直立展开，在可见光下可看到四个斑点，Rf≈0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚混合物，在此条件下分不开，其余三个斑点，依Rf值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）（3）PH梯度萃取分离①大黄酸的分离和提纯：将上述乙醚提取液以5 % 碳酸氢钠溶液振荡提取，

5、水层呈紫红色。分出水层，再重复提取数次，直至不显红色为止（共约60ml，分3~4次提取）。合并水层提取液，用盐酸酸化至pH3左右，即得黄色沉淀为大黄酸。②大黄素的分离和提纯：碳酸氢钠溶液提取后的乙醚层再以5%碳酸钠溶液振荡提取数次（共约120ml，分3~4次提取）水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得黄色沉淀，过滤，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗，在冰醋酸或吡啶中结晶数次，得橙色大针状结晶。经熔点测定、纸色谱或薄层色谱，与标准品对照鉴定为大黄素。③芦荟大黄素的分离和提纯：碳酸钠溶液提取后的乙醚层，再经0.25

6、% 氢氧化钠溶液振荡提取数次（约100ml，分3~4次提取），水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得橙色沉淀。过滤后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中结晶数次，得橙色长针状结晶。经熔点测定、纸色谱或薄层色谱鉴定为芦荟大黄素。④大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯：上述芦荟大黄素分离后的乙醚液用5%氢氧化钠溶液振荡提取数次，直至无色。合并深红色的水层溶液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀。过滤，水洗，干燥后得大黄酚和大黄素甲醚混合物五大黄素的提取，分离流程图流程图大黄粗粉30克20%硫酸150ml，加热1h，抽滤，

7、干燥滤饼乙酸乙酯回流提取1h乙酸乙酯层5%碳酸氢钠溶液萃取水层（紫红色）乙酸乙酯层5%碳酸钠水层（红色）乙酸乙酯层（弃掉）盐酸黄色沉淀（粗品）水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化大黄素结晶注意：1.游离蒽醌的提取要控制温度，不宜太高2.PH梯度萃取分离时，要检查是否萃取完全