[精品]大黄中大黄素的提取、分离和鉴定

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1、大黄中大黄素的提取、分离与鉴定一、实验目的（1）熟悉恿酿类成分的提取分离方法（2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术（3）掌握恵酿类化合物鉴定方法（4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法二、实验原理大黄为蓼科植物，味苦，性寒，具冇泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要冇效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲瞇等恵酿类化合物，其中大部分为结合的恵酿，少量为游离的蔥醞。结合的恵酿类化合物由于其苜元具冇酚起基，故呈弱酸性，能溶于水、乙醇、碳酸氮钠溶液，但在有机溶剂中的溶解度很小。游离的恵醜易溶于氯仿、乙瞇等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具冇竣基，酸性最强；大黄索具冇价

2、酚轻基，酸性第二；芦荟大黄索连有疑甲基，酸性第三；人黄素甲瞇和和人黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差界,可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。【1】本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醵、人黄素、芦荟人黄索•、人黄酸。【2】大黄酸：黄色针状结晶mp.321—322°C（升华），不溶于水，能溶于毗唳、碳酸氮钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙讎和石汕讎。大黄素：橙黄色针状结品，mp.256—257°C（乙醇或冰醋酸），能升华。其溶解度如下:四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙讎0.14%、苯0.041

3、%。易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，儿乎不溶于水。【3】OHOQH人黄酸大黄素芦荟大黄素Ri=HRi二CH3r1=ch2ohr2=coohr2=ohr2=hr2=och3r2=h大黄素甲讎R1=CH3人黄酚Ri=CH3三、实验器材试药：人黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸讷溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石汕醸、大黄索标准品等仪器：回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉30g[4]20%H2SO4150mlJ加热

4、lh,抽滤、干燥滤饼乙酸乙酯回流提取lh▼乙酸乙酯层5%NaHCO3萃取水层（紫红色）乙酸乙酯层5%Na2CO3水层（红色）乙酸乙酯层（弃掉）IHCI黄詡:淀（粗品）J水洗至小性，丙酮溶解，分离纯化大黄素结品具体操作步骤：1•游离恵酿的提取称収大黄粗粉30g,加20%H2S04水溶液150mL,加热1小时，放冷，抽滤，同时滤饼水洗至近中性（除去H2SO4）,于70C干燥后，置回流装置中，加入乙酸乙酯300mL回流提取1小时，得到乙酸乙酯提取液。2.PH梯度萃取分离（1）将乙酸乙酯提取液加入分液漏斗中，用5%NaHCO3水溶液萃取三次，经观察乙酸乙酯层颜色变浅及无气泡

5、产牛为止。（2）经5%NaHCO3水溶液萃取后的乙酸乙酯层，继以5%Na2CO3水溶液萃取三次，乙酸乙酯层经薄层检杳（标准人黄素作对照），得知己提尽人黄素示，合并三次N^COs萃取液,并用HCI酸化，得大黄素沉淀。（注意:加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出）。3•大黄素的精制过滤大黄素沉淀，水洗沉淀物至洗出液呈屮性，用适最丙酮溶解，用白备薄层色谱分离纯化大黄素。薄层层析板上橙色层为大黄素，将其刮下溶于丙酮中。【2】用旋转蒸发仪浓缩丙酮溶液，得到大黄素结晶。4•人黄素的薄层色谱检识【5】薄层板硅胶CMC-Na板样品液口制大黄素溶液对照品标准大黄素溶液展开剂石油瞇■乙酸乙酯

6、（7：3）显色：观察斑点颜色及计算Rf值五、注意事项：（1）游离恵醍的提取要控制温度，不宜太高（2）PH梯度萃取分离时，要检查是否萃取完全（3）注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的彫响六、参考文献[1]黄兆胜，王宗伟。大黄素基原及药理作用研究（J}o国外医学中医中药分册,1997,19,9[2]康廷国主编，《小成药薄层色谱鉴别》.北京：人民出版社，1995【3】徐选明，刘新人黄屮人黄素提取工艺的优化屮国中医药信息杂志2004,11,5[4]李乃明，丁宙大黄索的分离和结构鉴定广州医学院学报1985,13,3[5]朱庆玲，李瑞和大黄中大黄素的提取工艺研究吋珍国医国

7、药2006,17,3