大黄素的提取分离与鉴定

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1、大黄中大黄素的提取.分离与鉴定一实验目的1）熟悉蔥醍类成分的提取分离方法2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术3）掌握蔥醍类化合物鉴定方法4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法二实验原理大黄为蓼科植物，味苦，性寒，具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲瞇等蔥陀类化合物，其中大部分为结合的蔥酿,少量为游离的蔥醞。结合的蔥陀类化合物由于其苜元具有酚疑基，故呈弱酸性，能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液，但在有机溶剂中的溶解度很小。游离的蔥醍易溶于氯仿、乙醸等有机溶剂而不溶于水。其中，大黄酸具有竣基,酸性最强；大黄素具有酚

2、径基，酸性第二；芦荟大黄素连有疑甲基，酸性第三；大黄素甲瞇和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差界，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度苹取分离。大黄酸RlHR2二COOH大黄素RlCHsR2二OH芦荟大黄素R尸CH2OHR2二H大黄素甲瞇RfCILR产OCIL大黄酚Ri=CH3R产H本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其&值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醯、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。大黄酸：黄色针状结晶，mp.321—322°C（升华），不溶于水，能溶于毗旋、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醯和石油醯。大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256-

3、257°C（乙醇或冰醋酸），能升华。其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙瞇0.14%、苯0.041%。易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，儿乎不溶于水。三实验器材1）试药：大黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醸、大黄素标准品等2）仪器：回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪、循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等四实验内容1)，水解:用天平称取大黄粉10g,置500ml烧杯中，加20%H2S04水溶液100ml

4、,直火加热1小时，用布氏漏斗抽滤，滤饼水洗后于70°C左右干燥。溶液沸腾时关闭电源，不沸腾时再打开，注意不要把溶液烧干，大黄粉从土黄色变为黑色。2）总径基蔥昔元的提取：滤饼经干燥后，置索氏提取器中，加入乙瞇150ml,回流提取2小时，得乙醞提取液。乙瞇提取液经薄层色谱检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲瞇和大黄酚。薄层板为硅胶CMC-Na板，展开剂为石油醯（沸程60~90°C）-乙酸乙酯（7:3）,近水平或直立展开，在可见光下可看到四个斑点，Rf~0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醸混合物，在此条件下分不开，其余三个斑点，依Rf值由大到小分别为大黄

5、素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）。3）pH梯度萃取分离①大黄酸的分离和提纯：将上述乙醛提取液以5%碳酸氢钠溶液振荡提取，水层呈紫红色。分出水层，再重复提取数次，直至不显红色为止（共约60ml,分旷4次提取）。合并水层提取液，用盐酸酸化至pH3左右，即得黄色沉淀为大黄酸。②大黄素的分离和提纯：碳酸氢钠溶液提取后的乙醴层再以5%碳酸钠溶液振荡提取数次（共约120ml,分3〜4次提取）水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得黄色沉淀，过滤，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗,在冰醋酸或毗噪中结晶数次，得橙色大针状结晶。经熔点测

6、定、纸色谱或薄层色谱，与标准品对照鉴定为大黄素。③芦荟大黄素的分离和提纯：碳酸钠溶液提取后的乙醴层，再经0.25%氢氧化钠溶液振荡提取数次（约100ml,分：T4次提取），水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得橙色沉淀。过滤后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中结晶数次，得橙色长针状结晶。经熔点测定、纸色谱或薄层色谱鉴定为芦荟大黄素。④丄黄酚和大黄素甲醴的分区和提纯：上述芦荟大黄素分离后的乙醴液用5%氢氧化钠溶液振荡提取数次，直至无色。合并深红色的水层溶液，加盐酸至酸性,得黄色沉淀。过滤，水洗，干燥后得大黄酚和大黄素甲瞇混合物。五大

7、黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4100ml加热lh,抽滤、干燥滤饼乙酸乙酯回流提取1hV乙酸乙酯层5%NaHCO3萃取水层（紫红色）乙酸乙酯层5%Na2CO3水层（红色）乙酸乙酯层（弃掉）IHCI咯色沉淀（粗品）J水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化大黄素结晶六注意事项1）游离蔥醍的提取要控制温度，不宜太高2）PH梯度萃取分离吋，要检查是否萃取完全3）注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。七实验结果根据各步骤得岀的结果如下：1）总疑基蔥醜昔元的提恥硅胶板在可见光下可看到四个斑点，依Rf值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素

8、（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）。薄层色谱检查结果：被分离物质大黄酚和大黄素甲醯