方案)大黄素的提取分离和鉴定

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1、大黄索的提取分离和鉴定（实验方案）一、药物简介【英文名称】:Emodin【大黄素别名】：朱砂莲甲素【化学名1：1'3'8-三轻基-6-甲基蔥酿【分子式】：C15H10O5【分子量】：270.23【结构式】：【植物来源】：为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。掌叶大黄的根茎。【物理性质】：橙黄色长针状结晶（丙酮中结晶为橙色，甲醇中结晶为黄色），熔点256°C〜257°C。具有葱醍的特殊反应。儿乎不溶于水，溶于乙醇及碱溶液。【药理药效】：大黄索可用作泻药，虽有泻下活性，但由于体内易被氧化破坏，实际上泻下作用很弱，如与糖结合成昔类，则可发挥泻下

2、作用。大黄素国内专业生产商西安融升生物目前表示大黄素-1-0-0-D-葡萄糖昔和大黄素-8-0-B-D-葡萄糖卄者是大黄素与葡萄糖结合的卄，二者只是结合的位置不同，同时存在于大黄中。另有抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等作用。二、实验目的1•掌握大黄素的提取原理及方法。2.熟练掌握大黄素提取实验方法操作。3.了解大黄素的不同提取方法。三、实验原理游离的蔥酿易溶于氯仿、乙瞇等有机溶剂而不溶丁水。其中,大黄酸具有竣基，酸性最强；大黄素具有酚疑基，酸性第二；芦荟大黄素连有轻甲基，酸性第三；大黄素甲瞇和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差

3、异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。大黄酸：黄色针状结晶mp.321—322°C（升华），不溶于水，能溶于毗唳、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙瞇和右油醸。大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257°C（乙醇或冰醋酸），能升华。其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醯0.14%、苯0.041%。易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。试剂：大黄粗粉、90%乙

4、醇、25%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油讎、冰醋酸、大黄素标准品等仪器：冋流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪、循环水式多用真空泵、抽滤瓶等。五、实验内容大黄素提取分离流程图1、大黄粗粉30g加8倍量的90%乙醇240ml于500ml的圆底烧瓶中。冋流2次，温度80°C,时间lh合并滤液，滤液浓缩至50ml加入25%硫140ml,沸水浴中回流5min乙酸乙酯萃取乙矗乙酯层5%NaHCO3水蔭（紫红色）乙酸N酯层5%Na2CO3乙酸乙酯层

5、水层（红色）盐酸黄童沉淀（粗品）水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化大黄廉结晶具体步骤：a.游离蔥酿的提取搭好回流装置取大黄30g,加8倍量的90%乙醇240ml于500ml的圆底烧瓶中回流2次，温度80°C,时间lh,合并滤液滤液浓缩至50ml（旋蒸仪）加入25%硫酸140ml沸水浴中回流5min倾出水解液，用乙酸乙酯萃取两次（100ml）,合并提取液。b.pH梯度萃取分离将乙酸乙酯提取液加入分液漏斗中，用5%NaHCO3水溶液萃取三次，（经观察乙酸乙酯层颜色变浅及无气泡产生为止）。经5%NaHCO3水溶液萃取后的乙酸乙酯层，继以5%

6、Na2CO3水溶液萃取三次，乙酸乙酯层经薄层检查（标准大作对照），得知已提尽大黄素后，合并三次Na2CO3萃取液，并用5%HC1酸化，得大黄素沉淀。（注意:加酸吋应缓慢加入，以防酸液溢出)。2、大黄素的精制过滤大黄素沉淀，水洗沉淀物至洗出液呈中性，用适量丙酮溶解，用口备薄层色谱分离纯化大黄素。薄层层析板上橙色层为大黄素，将其刮下溶于丙酮中。用旋转蒸发仪浓缩丙酮溶液，得到大黄素结晶。3、大黄素的薄层色谱检识薄层板：硅胶CMC-Na板样品液：自制大黄素溶液对照品：标准大黄素溶液展开剂：石油醸■乙酸乙酯■冰醋酸(15：2：:1)显色：观

7、察斑点颜色及计算Rf值4、注易事项(1)游离蔥醞的提取要控制温度，不宜太高(2)PH梯度萃取分离时,要检查是否萃取完全(3)注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。六、讨论1•蔥醍类化合物的含量测定有哪些方法？各有什么优缺点?答：含量测定方法有比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法、及重现性较差。薄层扫描相对简单，在一块板能处理许多样品，但因其为封闭系统，受外界影响较大，导致其测定的结果的重现性较差。高效液相色谱法需要解决好样品的前处理问题，则比较准确、可行。高效毛细管电泳法虽然有许多的优点，但它一直处于被研究和改进的阶段，技

8、术上不是很成熟。