槐米中芦丁的提取、分离和鉴定

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1、槐米中芦丁的提取、分离和鉴定张景清（广西科技大学生物与化学工程学院广西柳州545006）1.摘要:本实验以槐米为原料，采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。该方法提取率高达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对比，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度大致相等。2.引言芦丁,亦称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐米和荞麦叶中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁属于黄酮类化合物,在心脑血

2、管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用,具有VP样作用。有助于保持毛细血管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。其临床效果肯定,副作用少,同时也是一种植物原料药[1]。黄酮类化合物的提取方法较多主要是依据其溶解性及酸性。黄酮类化合物的提取方法一般有：①热水提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。3.实验原理槐米中含芦丁、槲皮素、皂苷、白桦、酯醇等多种成分。芦丁是其主要成分，含量为16%-25%

3、。芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲皮素，糖基为芸香糖。芦丁为浅黄色细小针状结晶，95-97℃脱水，熔点314℃，可溶于沸乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮，不溶于石油醚和水。芦丁可溶于碱液中，呈黄色酸化后又析出，故可采用碱提酸沉法得到芦丁产品。然后利用在冷水中不溶，在热水中微溶的溶解度差精制，可获得纯度高的微细针状结晶，最后利用芦丁、槲皮素、及糖的性质予以鉴定。4.实验部分4.1实验药品槐米（市售），氧化钙AR（西陇化工股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（广东省台

4、山市化工厂），甲醇AR（天津市大茂化学试剂厂），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化工试剂厂），乙醇（分析纯）4.2实验仪器JJ200电子天平（常熟市双杰测试仪器厂），SHZ-D（III）循环水式多用真空泵（河南爱博特科技发展有限公司），ZNLC-GS130*60智能磁力搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司），薄层色谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）4.3实验步骤4.3.1芦丁的提取方法一：称取槐米10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加入250ml水，加

5、热搅拌下添加石灰乳，保持PH=8-8.5。加热至80℃左右时加入硼砂0.2g，搅拌下加热至沸20min，稍置，倾出上清液过滤。对残渣用200ml水重复提取一次。弃去残渣，合并滤液。用10%盐酸调PH为5，静置过夜，过滤，用少量蒸馏水洗2-3次，抽干即可得芦丁粗品。方法二：称取槐米10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于500ml烧杯中，加入沸蒸馏水250ml，加热搅拌下继续加热至沸30min，稍置，趁热倾出上清液，以脱脂棉过滤。对残渣用200ml水重复提取一次。趁热过滤，合并滤液。用1%盐酸调PH为5，静置过夜，过

6、滤，用少量蒸馏水洗2-3次，抽干即可得芦丁粗品。4.3.2芦丁精制取粗品2.0g转入烧杯中，加入适量蒸馏水（350ml左右），加热至沸添加适量蒸馏水，使之刚好溶解完全，趁热抽滤，静置过夜，使晶体析出。抽滤，用少量水洗2次，在70-80℃下干燥结晶，即可得精制芦丁。4.3.3芦丁的薄板识别将实验所得的芦丁用甲醇溶解，并与标准芦丁的甲醇溶液分别点在聚酰胺板上，用氯仿：甲醇（5:4）展开。紫外灯下观察荧光，喷2%三氯化铝乙醇溶液后再观察荧光变化，计算Rf值。4.3.4紫外光谱的鉴定配置标准芦丁的甲醇溶液测其之外光谱。

7、取0.5g研磨好的槐米粉末，加10ml甲醇，在超声波下提取5min，过滤，滤液作为芦丁样品溶液。向比色皿中滴加1-2滴芦丁样品溶液，并加入适量甲醇溶液，测其紫外光谱，并与标准芦丁的紫外光谱作对比。5.结果与讨论5.1结果5.1.1提取率方法一抽滤后得到了1.45g芦丁样品，提取率为14.5%；方法二抽滤后得到了2.63g芦丁样品，提取率为26.3%；5.1.2芦丁收率取2.0g粗产品进行重结晶，最后得芦丁精品1.8g，收率为90%5.1.3芦丁识别及Rf值得测定①号板：a标=1cm，a样=2cm，b=5.1cm

8、。则Rf标=0.196，Rf样=0.392②号板：a标=1.5cm，a样=2cm，b=4.5cm。则Rf标=0.333，Rf样=0.4445.1.4紫外光谱的鉴定由紫外谱图看出，两峰的位置及形状基本一致，可定性的判断为同一种物质。5.2讨论在使用方法一提取芦丁时，收率较低。是因为在碱提时pH调的不够高，影响芦丁的提取率；在酸沉时调的不够低，降低了芦丁的析出。比较1号和2号的薄板识别，溶