研究化合物抗肿瘤机制实验方案

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1、研究化合物抗肿瘤机制实验方案一、实验目的1、学习掌握肿瘤细胞的培养方法。2、学习掌握抗肿瘤药物的各种抗肿瘤机制。3、了解各种抗肿瘤机制下肿瘤细胞形态及代谢的表现。二、实验原理肿瘤（Tumor）是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致苴克隆性异常增生而形成的异常病变。显微镜观察肿瘤的形态多种多样，并可在一定程度上反映肿瘤的良恶性。目前，抗肿瘤药物种类繁多，其作用机制一般包括：干扰核酸生物合成：又分为抗喋吟药：即喋吟核昔酸合成抑制剂，如銃卩票吟、硫鸟瞟吟、喷司他丁等。抗卩密唳药：主要靠抑

2、制U密唳的生物合成而起到抗瘤作用，女口：氟尿卩密唳。抗叶酸药：为二氢叶酸还原酶抑制剂，如甲氨蝶吟。核昔酸还原酶抑制剂：如轻基腺。DNA多聚酶抑制剂，如阿糖胞昔。破坏DNA结构和功能的药物：有烷化剂、丝裂霉素、顺釦、丙卡巴胁等可与DNA交叉联结；博莱霉素靠产生自由基破坏DNA结构。嵌入DNA中干扰转录DNA的药物：如放线菌素类、柔红霉素、阿霉素等。影响蛋白质合成的药物：如门冬酰胺酶、紫杉醇、秋水仙碱、长春花生物碱类等。影响体内激素平衡的药物：如雌激素、孕激索和肾上腺皮质激素等。本实验是选取各个机制的代表纱物与实验组进行对比试验，通过

3、结果的观察对比确定化合物抗肿瘤机制的类别。三、实验仪器及试剂仪器：培养箱、培养瓶、吸管、超净台、酒精灯、离心机、显微镜、鼠笼，注射器，手术用具等。试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）、Hanks液、喷司他丁、氟尿卩密噪、甲氨蝶吟、轻基腺、阿糖胞甘、丝裂霉素、阿霉素、秋水仙碱、肾上腺皮质激素注射液、生理盐水，试验用带肿瘤小鼠。四、实验步骤实验一：1.1肿瘤细胞培养1.取肿瘤细胞组织剪碎至灭菌培养瓶中，加入5mlhanks液轻摇，静止l-2min,吸上层悬浮液，用同样的方法洗涤2次后，取出吹干；2.将上述细胞放置于

4、据有培养基的培养瓶中培养一周3•将培养好的细胞用吸管分至于九个培养皿中编号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10.1.2化合物对肿瘤细胞的作用及对照1・1作为空白对照，2加入化合物进行培养2.3加入喷司他丁3.4加入氟尿卩密噪4.5加入甲氨蝶吟5.6加入軽基腺6.7加入阿糖胞营7.8加入丝裂霉素8.9加入阿霉素9・10加入秋水仙碱1.3培养细胞各个培养皿培养细胞0.5周，然后显微镜观察细胞形态及代谢变化，并与化合物培养皿做比较，记录变化细节。实验二2・1带肿瘤小鼠选取选取同龄体重相似同性别感染同一部位肿瘤的小鼠三只，并标记编号为

5、1、2、3,分别隔离饲养。2.2对小鼠进行药物注射对1号小鼠注射肾上腺皮质激素适量，对2号小鼠注射等量该化合物溶液，对3号小鼠注射等量生理盐水。2.3饲养及观察用同样方法饲养各个小鼠，每周对小鼠进行对比观察，并分离部分肿瘤细胞在显微镜下对比观察，记录观察结果五、结果分析对比实验一中各个培养皿中细胞的镜下形态，找出与实验组类似的，可能该化合物与其加入药物作用机制相同；对比实验二中各个组小鼠状态变化是否一致，以及分离的肿瘤细胞在镜下的形态特征是否一致，如果都一致，则该化合物的作用机制与1号小鼠所用药物作用机制可能相同;本实验通过对比以

6、找出该化合物抗肿瘤机制与已知药物的作用机制是否一致，若都不一样，则应进一步实验观察细胞形态及代谢变化，以确定该化合物抗肿瘤作用机制。