蟾皮中抗肿瘤小分子化合物的获取和抗肿瘤作用机制的研究

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1、蟾皮中抗肿瘤活性小分子化合物的获取和抗肿瘤作用机制研究中文摘要第一部分蟾皮中抗肿瘤活性小分子化合物的获取和抗肿瘤作用机制研究研究背景和目的卫生部《2008中国卫生统计年鉴》中的资料显示，恶性肿瘤已经成为严重危害我国人民生命健康的首要因素，尤其在大城市中，其死亡率占所有死因构成比的28．84％，对我国人民的生活和健康形成了极大的威胁。从世界范围内来看，恶性肿瘤也已经成为人类的头号杀手。尽管恶性肿瘤可以通过手术、化疗、放疗等手段部分根治或缓解，抗肿瘤药物的研发在过去的十多年也取得了长足的进步，但手术治愈率低、放化疗毒副反应严重使患者难于承受的局面没有根本改观，继续寻找特异性强、高效低毒的抗肿瘤

2、药物，仍然是医学领域的研究热点。近年来，由于定向设计、合成先导药物及从组合化合物库中获得抗肿瘤药物前体愈来愈困难，并且化学药物相对毒副作用较强，所以人们已将目光转向天然药物。具有悠久历史并能有效治疗肿瘤的中药在医学界备受关注，经常作为放疗或者化疗的辅助方法。从中药中提取有效成分并将之开发成新药，是中药进入国际市场的一种有效方式。我国已在这一领域积累了一定的经验。从中药青蒿中研制出来的青蒿素及其衍生物的制剂，是目前治疗疟疾最好的药物，就是中药发展获得成功的一个典型。已经从蟾蜍中分离出来的单体化合物有蟾毒灵、华蟾蜍精醇等蟾蜍二烯内酯类化合物，临床中多作为强心剂使用，对其机制的研究也较为透彻。现

3、代中药学研究表明蟾皮及其制剂治疗肝癌、肺癌等恶性肿瘤疗效确切。目前在临床上广泛应用的蟾蜍来源的抗肿瘤制剂主要有华蟾素注射液、华蟾素胶囊等。但是因为工艺粗糙，纯度不高，成分复杂，易导致毒副反应，且抗肿瘤机理不明，故其治疗价值受限；此外，已经从蟾皮及其制剂中分离出的有抗肿瘤活性的化合物多为脂溶性，对于蟾皮中的水溶性组分尚未见有深入的开发。本研究将采用生物检定导向的分离策略，借助于先进的分离纯化手段，对蟾皮水溶性组分进行了深入的分离纯化和活性研究，揭示蟾蜍中的药效组分对肿瘤第二军医大学2006级硕士学位论文细胞信号通路的调控作用，明确其抗肿瘤作用机理，为进一步开发天然抗肿瘤药物提供科学的理论依据

4、及特异、有效的小分子药性化合物／先导化合物。实验方法：1．利用工业色谱、高效液相色谱和纯化工厂技术平台对蟾皮的组分进行层层深入的分离纯化；2．采用CCK．8法对分离出的各级组分进行抗肿瘤活性鉴定；3．应用流式细胞术分析蟾皮活性组分对肿瘤细胞周期的影响；4．利用WesternBlot和RT-PCR等分子生物学技术，初步探讨蟾皮活性组分调节肿瘤细胞中目的基因表达的情况；5．建立活体成像荷瘤小鼠模型，长期监测药效组分体内治疗效果。结果：1．在蟾皮的4种工业色谱粗提组分中，Ⅳ号具有抗肿瘤活性；该组分在10叫mg／ml水平就表现出抑制肿瘤细胞增殖的效应，且随着浓度的升高而增强；2．在Ⅳ号粗提组分进一

5、步分离出的11种初筛组分中，第11号(HCS411)具有抗肿瘤活性，且活性强于IV号组分；3．肝癌、肺癌、白血病和前列腺癌细胞对HCS41l最敏感，乳腺癌、骨肉瘤和食管癌细胞较敏感，宫颈癌和结肠癌细胞不敏感；4．与正常肝细胞相比较，HCS41l对肝癌细胞呈现一定的特异性；5．HCS411的抑制肿瘤细胞增殖活性较目前I临床抗肿瘤常用的华蟾素注射液及顺铂均强；6．HCS411可以通过诱导G2／M期阻滞抑制肿瘤细胞增殖；7．HCS411抗肿瘤活性不依赖P53：8．HCS411经纯化工厂分离后得到60个精细组分，有7个有较强的抗肿瘤活性；其中以2-SX048429活性最强；9．荷瘤动物模型活体成像

6、检测结果显示，2-SX048429活性成份在体内也有较强的抗肿瘤作用。结论：一2一蟾皮中抗肿瘤活性小分子化合物的获取和抗肿瘤作用机制研究本研究采用生物鉴定导向的分离方法，首次从蟾皮可溶性组分中逐步分离出了具有抗肿瘤活性的7个精细组分，为进一步发现抗肿瘤小分子化合物奠定了良好的基础；对其抗肿瘤机制进行的初步研究表明，这些组分可以通过不依赖于p53的方式使肿瘤细胞阻滞于G2／M期，进而抑制肿瘤细胞增殖。关键词：Toadskin，Isolation，Anticancer,Proliferation，一3一第二军医大学2006级硕士学位论文第二部分镍化合物通过调控细胞周期的致癌机制研究背景和目的肺

7、癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，也是全球发病率和死亡率增长最快的肿瘤。在世界大多数国家，肺癌的患病率和死亡率呈逐年上升的趋势，尤其是发达国家，肺癌在男性常见的恶性肿瘤中居首位。尽管目前对于肺癌的诊断和治疗方法较过去都有了很大改进，但肺癌的早期诊断困难、术后复发及转移率高等仍是临床研究的瓶颈问题。目前迫切需要从预防入手，从根源上控制这种对人类威胁极大的疾病。而要采取有效的预防措施，就必须深入了解肺癌发生的病因。虽然肿瘤的发生