华蟾素在骨肉瘤细胞中的抗肿瘤作用及其机制实验研究

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1、分类号学号学校代码密级博士学位论文华蟾素在骨肉瘤细胞中的抗肿瘤作用及其机制实验研究学位申请人：马秀才学科专业：骨外科指导教师：邵增务教授答辩日期：年月AdissertationsubmittedtoazHuazhongUniversityofScienceandTechnologyfortheDegreeofDoctorResearchontheanti-tumoreffectsofCinobufaciniinosteosarcomacellsanditsmechanismsD.Candidate:MaxiucaiMajor:OrthopaedicsSupervisor:Pr

2、of.ShaozengwuHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074，中科技大学济医学院独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，卩：学校有权保留并向国家有关部门或机

3、构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密‘请在以上方框内打“”目录縮写词表第一部分华蟾素诱导骨肉瘤细胞凋亡及其可能机制实验研究：引言材料和方法结果讨论参考文献第二部分华蟾素联合化疗药物在骨肉瘤细胞抗肿瘤作用的实验研究引言材料和方法结果讨论参考文献综述附录■华中科技大学博士学位论文缩写词表英文缩写英文全称中文全称二脒基苯基口引口朵培养基二甲基亚砜胎牛血清辣根过氧化物酶半数抑制浓度糖原合成酶激

4、酶四甲基偶氮唑盐核转录因子聚丙烯酰胺凝胶电泳多聚核糖聚合酶碘化丙啶聚偏二氟乙稀碱平衡盐溶液原位末端标记华中科技大学博士学位论文卩链蛋白华中科技大学博士学位论文华蟾素在骨肉瘤细胞中的抗肿瘤作用及其机制实验研究华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科博士研究生马秀才导师邵增务教授摘要第一部分华蟾素诱导骨肉瘤细胞凋亡及其可能机制实验研究目的探讨华蟾素诱导骨肉瘤细胞凋亡的效果及其可能机制。方法将不同浓度华蟾素作用于骨肉瘤细胞，法被用来检测每组骨肉瘤细胞的生长抑制率，染色法被用来观察细胞凋亡程度并计算其凋亡率，免疫荧光染色、、以及被用来检测调亡相关以及通路相关蛋白。结果严格按照上述方法处

5、理骨肉瘤细胞后，结果显示，随着华蟾素浓度和作用于细胞时间的增加，细胞生长抑制率明显增加，并呈时间浓度依赖性关系。当华蟾素作用于骨肉瘤细胞不同时间后，细胞凋亡以及凋亡率随着作用时间的延长，其变化程度增加也更加明显。与作用于细胞、相比，华蟾素处理细胞后细胞中凋亡相关蛋白的表达逐渐增加，而逐渐减少，并且比值也增加明显（。通路相关蛋白的表达量与华膽素作用时间也呈正相关。结论华蟾素能诱导骨肉瘤细胞凋亡，其效果呈浓度和时间依赖性，而其机制可能与激活通路有关。华中科技大学博士学位论文关键词：华蟾素细胞凋亡通路华中科技大学博士学位论文第二部分华蟾素联合化疗药物在骨肉瘤细胞中抗肿瘤作用的实验研

6、究目的：探讨华蟾素联合化疗药物在骨肉瘤细胞中的抗肿瘤作用。方法将实验分为四组，即对照组、华蟾素组、紫杉醇组、华蟾素紫杉醇（联合组）。法用来衡量各组骨肉瘤细胞的生长抑制情况，染色用来观察细胞凋亡程度并计算其凋亡率，免疫荧光染色、、以及用来检测凋亡相关以及通路相关蛋白。结果试验结果显示，当不同组别药物作用于骨肉瘤细胞后，华蟾素组细胞生长抑制率低于紫杉醇组，但联合组细胞生长抑制率明显增加。当华蟾素联合紫杉醇作用于骨肉瘤细胞后，其凋亡率增加的程度较单独用药更加明显（。免疫荧光染色显示：在华蟾素、紫杉醇、以及二者联合用药分别作用于骨肉瘤细胞后，被测蛋白、的荧光强度较对照组均有所增强，而

7、荧光强度有所减弱，但联合组上述蛋白荧光强度变化更明显。免疫荧光、、以及结果显示：华蟾素、紫杉醇、及二者联合用药均能使、表达增加，而使表达减少，但联合用药对上调和表达及下调表达能力均强于单独用药（。结论华蟾素联合紫杉醇对骨肉瘤具有明显的抗肿瘤效果，能促进和抑制的表达，其机制可能与激活通路有关。关键词：华蟾素紫杉醇骨肉瘤通路华中科技大学博士学位论文，，：，，，华中科技大学博士学位论文华中科技大学博士学位论文，，、、华中科技大学博士学位论文华中科技大学博士学位论文别骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，是由恶性增