白细胞介素23在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫机制

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1、白细胞介素23在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫机制：冯永路,刘爽,邵丽丽,单保恩【摘要】目的:研究白细胞介素23（IL23）在小鼠乳腺癌中的抗肿瘤作用及其免疫功能变化。方法:将逆转录病毒介导转染IL23基因的小鼠乳腺癌细胞（IL23/MA891)、转染逆转录病毒空载体的小鼠乳腺癌细胞(LXSN/MA891)及亲代小鼠乳腺癌细胞(MA891)分别接种于小鼠皮下,观察小鼠成瘤及肿瘤生长情况;30d时取3组小鼠脾脏和肿瘤组织,用ELISA法检测3组小鼠脾细胞在MA891诱导下IFNγ、T

2、NFα、IL12和IL4的产生情况;用流式细胞术（FCM）检测肿瘤组织细胞表面分子MHCⅠ、MHCⅡ、CD80、CD86的表达,检测脾细胞中CD11c阳性细胞的比率,并对脾细胞中CD4+、CD8+淋巴细胞进行分选;用免疫组织化学技术对3组肿瘤组织中CD4+、CD8+淋巴细胞浸润情况进行检测。结果:IL23基因转染组小鼠皮下结节生长速度明显慢于接种空载体转染组及未转染组;接种IL23/MA891细胞的小鼠脾细胞可产生较水平的IFNγ、TNFα和IL12等Th1类及相关细胞因子,与

3、接种LXSN/MA891细胞和MA891细胞2组小鼠的脾细胞相比明显增高（P<0.01）,而Th2类细胞因子IL4的水平却无统计学意义（P>0.05）;接种IL23/MA891细胞组小鼠脾细胞中CD11c阳性细胞率、CD4+、CD8+淋巴细胞比率以及肿瘤组织中CD4+、CD8+淋巴细胞浸润程度均较LXSN/MA891、MA891组明显增加（P<0.01）;IL23/MA891细胞组小鼠肿瘤组织细胞表面MHCⅠ、MHCⅡ、CD80、CD86分子的表达明显提高（P

4、<0.01）。结论:转染IL23基因的小鼠乳腺癌细胞所分泌的IL23具有生物学活性,增强了细胞免疫功能,在小鼠体内发挥了明显的抗肿瘤作用。【关键词】白细胞介素23;抗肿瘤;免疫机制;MA891肿瘤的发生和发展是多种因素作用的结果。机体免疫功能在控制肿瘤的发生和发展方面发挥着重要的作用［1］,机体免疫监视功能的下降,肿瘤细胞产生的免疫抑制因素以及肿瘤细胞的免疫逃逸作用等是肿瘤发生和发展的原因之一［2］,因此,提高机体的免疫功能,就有可能起到抗肿瘤的作用。白细胞介素23（IL23）是200

5、0年发现的一种由p19亚基和p40亚基共同构成的1种细胞因子［3］,主要于活化的单核巨噬细胞和树突状细胞（DC）,是1种具有与IL12功能相近但更复杂的细胞因子。有报道提出,IL23可通过诱导和增强小鼠脾细胞CTL活性和IFNγ等细胞因子的产生而发挥抗肿瘤作用［3］,但与IL12相比,不会诱导淋巴细胞产生高水平的γ干扰素（IFNγ）,减少了毒副作用。因此,IL23作为肿瘤基因治疗的候选因子越来越受到关注。我们将转染有鼠IL23基因并能分泌IL23的小鼠乳腺癌细胞（IL23/MA8

6、91）接种于津白Ⅱ号小鼠体内观察肿瘤生长情况,研究IL23体内抗肿瘤作用及其免疫机制。1材料和方法1.1材料逆转录病毒介导转染IL23基因的小鼠乳腺癌细胞(IL23/MA891)、转染逆转录病毒空载体的小鼠乳腺癌细胞(LXSN/MA891)及亲代小鼠乳腺癌细胞(MA891)由河北医科大学第四医院科研中心保存(这些细胞用含有100mL/L胎牛血清（FCS）的RPMI1640培养基培养)。津白Ⅱ号小鼠（雌性,6～8周龄）购自天津医科大学实验动物中心。IFNγ、TNFα和IL4ELISA

7、检测试剂盒为晶美公司产品;IL12ELISA检测试剂盒购自上海森雄公司;FITC标记的抗小鼠CD11c、CD80、CD4、CD8单克隆抗体（mAb）及PE标记的CD86mAb抗均购自Biolegend公司;FITC标记的抗小鼠MHCⅠ类分子mAb和PE标记的抗小鼠MHCⅡ类分子mAb购自Ebioscience公司;兔抗鼠CD4、CD8抗体、山羊抗兔IgG抗体及SP试剂购自北京中杉金桥公司。1.2方法1.2.1小鼠荷瘤实验将津白Ⅱ号小鼠随机分为3组,分别于右侧背部皮下注射0.1mL（含5×105

8、个活细胞）的IL23/MA891、LXSN/MA891和MA891细胞。观察小鼠成瘤及肿瘤生长情况,各组小鼠每隔2d用游标卡尺测量皮下肿瘤长径和短径,用下列公式计算肿瘤体积:肿瘤体积（cm3）＝长径×短径2×1/2。1.2.2脾细胞分泌细胞因子的检测于接种IL23/MA891、LXSN/MA891和MA891细胞后30d,分别取3组各6只小鼠脾脏,无菌制备脾细胞悬液,按每孔0.1mL脾细胞(含2×105个)和0.1mL丝裂霉素处理的MA891细胞(含