秦皮素抗乳腺癌作用机制及其对免疫的调节作用

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1、分类号：密级：学校代码：10165学号：201011202遣事师籍大学硕士学位论文秦皮素抗乳腺癌作用机制及其对免疫的调节作用作者姓名：霍洪楠学科、专业：研究方向：导师姓名：2013年4月学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均己在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁

2、师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：继煎指导教师签名：签名13期：矽侈年石月辽宁师范大学硕士学位论文摘要乳腺癌已成为女性发病率最高的恶性肿瘤，占女性全部恶性肿瘤发病的16．8％。中国人口协会发

3、布的《中国乳腺疾病调查报告》显示：我国城市中乳腺癌的死亡率增长了38．91％，其发病呈年轻化趋势，严重威胁女性健康。雌激素受体(estrogenreceptor，ER)介导的信号通路在乳腺癌的发生、发展、浸润和转移过程中发挥着重要作用。雌激素与雌激素受体结合后，不但可以通过基因组信号通路与靶基因上的雌激素反应元件结合，促进靶基因转录，还可以通过非基因组信号通路快速激活下游丝裂原活化蛋白激酶(migoten—activatedproteinkinases，MAPKs)和磷脂酰肌醇3～激酶(phosp

4、hatidylinositol3-kinase，P13K)通路，影响细胞增殖与凋亡。乳腺癌的发生往往伴随着患者免疫系统低下，抗癌药物毒副作用不仅会影响患者免疫系统发挥正常生理功能，而且易产生多药耐药，给乳腺癌治疗带来一定的困难。中药具有毒副作用低、抗癌效果好、调节免疫力等功效，近年来成为研究的热点。香豆素是具有苯并(It吡喃酮母核的化合物，具有抗癌、提高免疫力、抗病毒、抗氧化、抗骨质疏松、抗菌、抗心律失常等多种生物活性，药用价值广泛。秦皮素属于简单香豆素类化合物，是中药秦皮的有效成分，因其具有抗肿

5、瘤、抗氧化等多种药理作用是近年来研究的热点。本文以MCF．7细胞为模型，系统的研究了秦皮素抑制MCF．7细胞ERa信号通路的作用机制，以体外分离的小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞为模型，初步研究了秦皮素对免疫的调节作用。具体研究结果如下：1．采用MTT比色法，检测秦皮素对MCF一7和MDA—MB．23l乳腺癌细胞增殖的影响，结果显示，秦皮素以时间和剂量依赖方式抑制乳腺癌细胞的增殖。2．采用划痕法，检测秦皮素对MCF一7细胞迁移能力的影响。结果显示，秦皮素能明显抑制MCF．7细胞的迁移。3．采用MTT

6、比色法和流式细胞仪分析，检测秦皮素对E2促MCF．7细胞增殖和抗凋亡作用的影响。结果显示，E2具有促进MCF．7细胞的增殖和抗细胞凋亡作用，秦皮素能抑制E2促MCF一7细胞增殖和抗细胞凋亡的作用，将E2诱导的MCF-7细胞阻滞在G0／G1期。4．采用Westernblot方法，检测秦皮素对MCF．7细胞ERa蛋白、E2诱导的靶基因蛋白cyclinD1、Bcl一2及下游MAPK／Erkl／2和P13K／Akt信号通路的影响。结果显示，秦皮素能降低ERa的表达量、抑制E2诱导的cyclinD1、Bcl

7、．2蛋白的表达，对下游非基因组信号通路MAPK／Erkl／2和P13K／Akt均有一定的抑制作用，其中，对MAPK／ErkI／2秦皮素抗乳腺癌作用机制及其对免疫的调节作用信号通路抑制作用更明显，说明MAPK／Erkl／2信号通路是秦皮素抗乳腺癌作用的主要靶点。5．采用尼龙毛柱法分离小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞，利用MTT比色法，分析秦皮素对小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖的影响。结果显示，在一定浓度范围内，秦皮素能促进小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖。6．采用MTT比色法和中性红吞噬法，检测

8、秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力和吞噬能力的影响。结果显示，秦皮素能提高小鼠腹腔巨噬细胞的代谢活力和吞噬能力。7．采用靶细胞幼生法，检测秦皮素对小鼠NK细胞活性的影响。结果显示，秦皮素能提高小鼠NK细胞的活性。关键词：秦皮素；抗乳腺癌；雌激素受体信号通路；免疫调节辽宁师范大学硕士学位论文Themechanismoffraxetinanti—breastcanceranditsroleinregulationoftheimmuneAbstractBreastcancerhasbeth