牛膝多糖免疫调节作用及其机制的研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文答辩委员会主席：医—皇垫拯——逝婆丝答辩委员会成员：工迭抠熬壑——差屋盛益逝塞握趔童态堂万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3第一部分前言前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一5第二部分材料及方法材料方法第三部分结果及分析讨论914结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21分析讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一36，

2、J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯』⋯⋯．．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40第四部分综述综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44综述参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49英文缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一54致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯57万方数据温州医科大学硕士学位论文牛膝多糖免疫调节作用及其机制的研究中文摘要目的牛膝多糖(Achyranthesbidentatapolysaccharides，ABPS)是从中药牛膝中提取的一种水溶性小分子多糖化合物，具有提高机体免疫功能，抑制肿瘤生长，保肝，升高白细胞及缓解炎症等多种生理活性。近年来，牛膝多糖在药理研究和临床应用上备受关注。但有关牛膝多糖免疫活性的研究报道大多仅局限于其对免疫细胞的活化或增值作用，并没有深入研究其作用机制。本文主要从细胞水平研究牛膝多糖对腹腔巨噬细胞(J774A)的免疫调节作用并探讨其作用

4、机制及信号转导途径，为牛膝多糖的进一步药物研发提供理论基础和实验依据。方法(1)采用光学显微镜观察牛膝多糖对J774A细胞形态的影响。(2)采用激光共聚焦显微镜观察ABPS对NF．r,B核转位的影响。(3)采用ELISA法检测ABPS对J774A细胞分泌炎性细胞因子(TNF．伐、IL．1p)的影响，及抗TLR4／TLR2／CDl4抗体和NF．rd3抑制剂对ABPS诱导J774A细胞释放TNF．仪、IL．1D作用的影响。(4)采用RT-PCR检测ABPS对J774A细胞n师．Q、IL．1p、TLR4、TLR2、MyD88、TRAM

5、、P．p38、p38MAPK等mRNA表达的影响。(5)采用WesternBlot检测ABPS对J774A细胞核内NF．r,B变化，及对细胞TLR4、TLR2、MyD88、TRAM、p-p38、p38MAPK表达的影响。结果(1)ABPS能够使J774A细胞表面突触明显地增加且具有浓度依赖性。(2)ABPS能够促进NF．r,B核转位。(3)ABPS能显著促进J774A细胞分泌炎性细胞因子TNF一伐及IL—lB，且具有浓度依赖性；NF．KB抑制剂(PDTC)fl皂够显著的抑制牛膝多糖刺激J774A细胞分泌细胞因子；抗TLR2抗体对

6、牛膝多糖刺激J774A细胞分泌细胞因子没有明显的抑制作用；抗TLR4抗体能够较显著地抑制牛膝多糖刺激J774A细胞分泌细胞因子。(4)ABPS能促进TNF．c【、IL．1pmRNA的表达，且具有浓度依赖性；能促进TLR4mRNA的表达，而对TLR2mRNA的表达没有明显差异；能显著的提高MyD88基因的表达，但TRAMmRNA的表达没有显著变化。万方数据温州医科大学硕士学位论文(5)细胞核内蛋白NF．v,B随ABPS给药组浓度的增高而增高；ABPS给药组与对照组比较TLR4的表达显著增高，而TLR2的表达没有明显差异，MyD88

7、表达明显升高，而TRAM的表达没有明显差异。结论ABPS能促进J774A细胞分泌炎性细胞因子耵师．(It及IL．1p且具有浓度依赖性，同时NF．rd3抑制剂PDTC及抗TLR4抗体能显著抑制ABPS刺激TNF．c【及IL．113的分泌；ABPS能促进NF．r．J3核转位；ABPS能够促进MyD88的表达，而TRAM的表达没有明显差异。综上所述，ABPS可能通过TLRs(TLR4)信号通路的MyD88依赖性途径介导其免疫调节作用。关键词牛膝多糖；Toll样受体；信号通路；NF-r,B2万方数据温州医科大学硕士学位论文Immunom

8、odulatoryEffectsandMechanismofPolysaccharidefromAchyranthesbidentatapolysaccharidesObjectiveAchyranthesbidentata—charideswasextract